沉淀型單組分TMB底物溶液使用說明
產品簡介:
TMB（四甲基聯苯胺；3，3’，5，5’-Tetramethylbenzidine）是檢測
辣根過氧化物酶（HRP）的靈敏顯色底物之一。 我公司研究開發的沉淀型單組份
TMB顯色底物液，適用于檢測膜上蛋白質的免疫學實驗結果顯示。本產品主要由
TMB和優化的反應緩沖液組成。免疫反應固定的HRP可催化本產品形成不溶性的
藍色絡合物，并沉淀結合在膜上，顯示目的蛋白的位置及表達量。
適用范圍:
Western Blot
其它通過沉淀反應檢測HRP的應用
主要成分：
產品使用說明:
本說明書是沉淀型單組分TMB底物溶液的一般使用說明，每個系統根據經驗來優化。
注意：
1、顯色時間過長可能導致底物沉淀從膜上脫落或背景加深。
2、顏色變化的快慢很大程度上取決于蛋白量、抗體使用量以及所使用的封閉液種類等。
1. TMB
2. H2O2及特殊的穩定劑
3. 導致TMB反應產物沉淀的特制化合物
自備溶液
PBS-T：PBS中含0.05%的Tween-20。
Western Blot膜封閉液
以合適的稀釋比率稀釋在封閉液中的一抗。每個系統一抗的最佳稀釋比率根據經驗來決定。
以合適的稀釋比率稀釋在封閉液中的HRP標記的二抗。每個系統二抗的最佳稀釋比率根
據經驗來決定。
操作步驟
1. 將膜從轉膜系統中取出后在封閉液中室溫搖動封閉30~60分鐘。
2. 加一抗室溫搖動孵育1~2小時。
3. 用PBS-T洗膜三次，再用PBS洗滌一次。
4. 加HRP標記的二抗室溫搖動孵育1小時。
5. 用PBS-T洗膜三次，再用PBS洗滌一次。
6. 將膜浸入沉淀型單組分TMB底物溶液中，反應2－30分鐘（根據顏色變化
掌握染色時間）。
7. 顯色完成后，用蒸餾水沖洗可終止顯色反應。
