小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16細(xì)胞

⒈瓊脂糖凝膠電泳的原理概述 瓊脂糖是由瓊脂分離制備的鏈狀多糖。其結(jié)構(gòu)單元是 D-半乳糖和3.6-脫水-L-半乳糖。許多瓊脂糖鏈依氫鍵及其它力的作用使其互相盤(pán)繞形成繩狀瓊脂糖束，構(gòu)成大網(wǎng)孔型凝膠。因此該凝膠適合于免疫復(fù)合物、核酸與核蛋白的分離、鑒定及純化。在臨床生化檢驗(yàn)中常用于LDH、CK等同工酶的檢測(cè)。

⒉瓊脂糖凝膠電泳分離核酸的基本技術(shù) 在一定濃度的瓊脂糖凝膠介質(zhì)中，DNA 分子的電泳遷移率與其分子量的常用對(duì)數(shù)成反比；分子構(gòu)型也對(duì)遷移率有影響，如共價(jià)閉環(huán) DNA＞直線(xiàn)DNA＞開(kāi)環(huán)雙鏈DNA。當(dāng)凝膠濃度太高時(shí)，凝膠孔徑變小，環(huán)狀DNA（球形）不能進(jìn)入膠中，相對(duì)遷移率為0，而同等大小的直線(xiàn)DNA
（剛性棒狀）可以按長(zhǎng)軸方向前移，相對(duì)遷移率大于 0。

⑴設(shè)備與試劑：瓊脂糖凝膠電泳分為垂直及水平型兩種。其中水平型可制備低濃度瓊脂糖凝膠，而且制膠與加樣都比較方便，故應(yīng)用比較廣泛。核酸分離一般用連續(xù)緩沖體系，常用的有 TBE（0.08mol/L Tris?HCl，pH8.5，0.08mol/L硼酸，0.0024mol/L EDTA）和THE（0.04mol/L Tris?HCl。pH7.8，0.2mol/L醋酸鈉，0.0018mol/L EDTA）。

⑵凝膠制備：用上述緩沖液配制0.5％-0.8％瓊脂糖凝膠溶液，沸水浴或微波爐加熱使之融化，冷至55℃時(shí)加入溴化乙錠（EB）至終濃度為0.5μg/ml，然后將其注入玻璃板或有機(jī)玻璃板組裝好的模子中，厚度依樣品濃度而定。注膠時(shí)，梳齒下端距玻璃板 0.5-1.0mm，待脫凝固后，取出梳子，加入適量電極緩沖液使板膠浸沒(méi)在緩沖液下 1mm處。

小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16細(xì)胞

鼠結(jié)締組織細(xì)胞胸苷激酶變異株L-M(TK-)  
小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞P815  
小鼠骨髓瘤細(xì)胞P3X63Ag8  
小鼠骨髓瘤細(xì)胞Sp2/0-Ag14  
小鼠成纖維細(xì)胞NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L]  
小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16-F0  
小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16-F1  
小鼠骨髓瘤細(xì)胞P3X63Ag8.653  
小鼠骨髓細(xì)胞FDC-P1  
小鼠成纖維細(xì)胞Φ2  
小鼠骨髓瘤細(xì)胞Fox-NY  
C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞（L929-TK-）LtK-11  
小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0  
小鼠骨髓瘤細(xì)胞P3/NSI/1-Ag4-1  
小鼠纖維肉瘤細(xì)胞WEHI-13VAR  
小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞A9  
小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16  
小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16-F10 
小鼠乳腺癌細(xì)胞MA782/5S－8101  
小鼠乳腺癌細(xì)胞GR-M  
小鼠乳腺癌細(xì)胞CCC-Ca761-03  
小鼠胰島內(nèi)皮細(xì)胞MS1  
小鼠胰島素瘤胰島β細(xì)胞Beta-TC-6  
小鼠乳腺腫瘤細(xì)胞C127 
小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞MC3T3-E1  
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞PA12  

小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16細(xì)胞
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞MEF  
小鼠原 B細(xì)胞株BaF3  
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞C3H 10T1/2 2A6  
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞BALB/C 3T3   
小鼠子宮頸癌細(xì)胞U14  
 小鼠子宮頸癌細(xì)胞U14-GFP  
正常小鼠睪丸 Sertoli細(xì)胞TM4  
小鼠胚胎細(xì)胞SC-1  
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(小鼠前體脂肪細(xì)胞)3T3-L1  
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞Psi2 DAP  
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞BALB/3T3clone A31  
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞C3H/10T1/2, Clone 8  
小鼠畸胎瘤細(xì)胞F9  
小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞MLTC-1  
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞NIH/3T3  
小鼠畸胎瘤細(xì)胞P19 

⑶樣品制備與加樣：溶解于TBE或THE內(nèi)的樣品應(yīng)含指示染料（0.025％溴酚藍(lán)或桔黃橙）、蔗糖（10％-15％）或甘油（5％-10％），也可使用2.5％FicoⅡ增加比重，使樣品集中，每齒孔可加樣 5-10μg。

⑷電泳：一般電壓為5-15V/cm。對(duì)大分子的分離可用電壓5V/cm。電泳過(guò)程在低溫條件下進(jìn)行。

⑸樣品回收：電泳結(jié)束后在紫外燈下觀察樣品的分離情況，對(duì)需要的DNA分子或特殊片段可從電泳后的凝膠中以不同的方法進(jìn)行回收，如電泳洗脫法：在紫外燈下切取含核酸區(qū)帶的凝膠，將其裝入透析袋（內(nèi)含適量新鮮電泳緩沖液），扎緊透析袋后，平放在水平型電泳槽兩電極之間的淺層緩沖液中，100V電泳2-3小時(shí)，然后正負(fù)電極交換，反向電泳2分鐘，使透析袋上的DNA釋放出來(lái)。吸出含 DNA的溶液，進(jìn)行酚抽提、乙醇沉淀等步驟即可完成樣品的回收。
其它還有低融點(diǎn)瓊脂糖法、醋酸銨溶液浸出法、冷凍擠壓法等，但各種方法都僅僅有利于小分子量 DNA段（＜1kb）的回收，隨著DNA分子量的增大，回收量顯著下降。