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一、準備1、物品：Trizol、氯仿（三氯甲烷）、異丙醇、75%滅酶異醇、冷PBS、1.5ml滅酶EP管、滅酶槍頭、一次性手套、EP管架、吸管2、打開冷凍離心機4℃預冷二、操作步驟：將Trizol、氯...
一、探針的類型核酸分子探針是指用放射性核素或其他標記物標記的、能與特定的靶分子發生特異性相互作用的DNA或RNA片段。1．基因組DNA探針：病毒DNA等2．cDNA探針；zui常用3．寡核苷酸探針：1...
聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性分析（SingleStrandConformationPolymorphismAnalysisofPolymeraseChainReactionProducts,PCR-S...
少量的DNA序列的準確定量曾經是一件很難很累的事情，不過realtimePCR的出現把它變為和普通PCR差不多一樣容易。原理是利用能特異標記PCR產物的熒光物質，顯示PCR產物的動態累積，得到S型的擴...
在做Northern等雜交實驗、構建cDNA文庫、獲取能夠編碼真核生物蛋白的基因、獲得RNA病毒基因時，會用到RNA提取和RT-PCR技術。真核生物的基因組是DNA，為什么不直接從DNAPCR得到我們...
常見問題具體情況可能的原因處理辦法備注樣品準備問題菌培養不好或失敗抗性不對或菌已死核對抗性，盡可能提供載體信息。或菌培養條件特殊重新提供菌液，或提供2ug純化質粒。質粒提不出質粒拷貝數極低或客戶自己采...
篩選之前確定G418濃度：1，由于每種細胞對G418的敏感性不同，而且不同的廠家生產的G418有效成分的比重不同，一般1g的粉劑中有效的G418含量大約為0.722g。2，G418是新霉素的類似物，兩...
磷酸鈣-DNA共沉淀法核酸以磷酸鈣-DNA共沉淀物的形式出現時，可使DNA附在細胞表面，利于細胞吞入攝取，或通過細胞膜脂相收縮時裂開的空隙進入細胞內，進入細胞的DNA僅有1%～5%可以進入細胞核中，其...
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提要分離并克隆差異表達基因是目前功能性基因研究的熱點。mRNA差異展示是篩選差異表達基因zui有效的技術之一，它的主要不足是有一定假陽性。RDA、SSH、DSD、LSH技術能夠克服假陽性，但也具有一定...
1顯性標記與選擇效率一部分分子標記系統如RAPD、AFLP具有顯性或部分顯性的特點，無法區分基因是純合還是雜合，不能提供完整的遺傳信息。Haley等（1994）提出相斥相（Repulsion－phas...
核酸以磷酸鈣-DNA共沉淀物的形式出現時，可使DNA附在細胞表面，利于細胞吞入攝取，或通過細胞膜脂相收縮時裂開的空隙進入細胞內，進入細胞的DNA僅有1%～5%可以進入細胞核中，其中僅有不到1%的DNA...
溶液配制（一）lb培養基每1000mL加分析純NaCl10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，用ddH2O配制，再用10MNaOH調pH至7.4（100mL一般加450µL），高溫高壓蒸汽滅菌1...
菌落PCR（ColonyPCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進行重組體的篩選或者DNA...
在已知基因部分核苷酸序列或全部核苷酸序列的情況下，基因的制備方法主要可分為兩大類：一類是基因化學合成法，一類是基因生物制備法。一般又可將基因生物制備法分為基因組文庫法、cdna文庫法和PCR法等。1化...
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