目的與原理

轉化是指以質粒dna或以它為載體構建的重組子導入細菌的過程。轉化技術在基因工程領域中占有極重要的地位。目前用得較多的轉化技術為將人工構建的重組質粒到如受體細胞，使重組質粒在受體細胞中穩定地復制和表達。

二、材料和方法

1.材料：大腸桿菌

2.儀器：

離心機，恒溫搖床，恒溫水浴，超凈工作臺，冰柜

3.試劑

lb培養基; 0.1M mM CaCl2 ; 0.1M MgCl2 ;

TFB：10mM MES(pH 6.3),45mM MnCl2, 10mM CaCl2, 100mM KCl

三、操作步驟

1. 感受態細胞融化(在手心)

2. 加入溶于TE的待轉化外源DNA，冰浴30min。

3. 42℃熱沖擊2 min。

4. 冰上2min。

5. 加入0.4 ml LB液體培養基，37℃保溫搖床45 min

6. 取0.2ml菌懸液涂布在含氨芐青霉素、IPTG、X-gal培養基上，37℃培養。

四、實驗結果及分析：

培養皿上有白色菌落和蘭 色菌落，但蘭色菌落數量很少。由于受體細胞本身的菌落為蘭色，所以白色菌落說明轉化成功;蘭色應為轉化不成功。但是由于轉化的質粒經過了酶切和連接，若是在原酶切位點的連接進行的轉化，菌落為白色;若為酶切去一段DNA的的連接質粒進行的轉化，菌落為蘭色(說明在酶切上成功，連接上也成功，轉化上也成功)。

五、注意事項

關鍵要嚴格控制熱激時間，超過2min，則轉化會失敗。