體外通過基因工程手段所構建的含目的基因的重組質粒,選用轉化和篩選技術,可獲得含重組的陽性克隆.在此陽性克隆中,DNA可在生物體系中大量擴增,繁殖,保存以及表達目的基因的產物,這是PCR體外擴增DNA所不能替代的.配合DNA重組技術,所獲得的,不同目的需要的陽性菌株已廣泛應用于科研,醫藥生產和生物發酵等領域.

質粒轉化不同細菌有不同的轉化效率,轉化效率的高低與實驗的成敗直接相關, 通常轉化效率可達105-107轉化子/μg DNA.獲得高轉化效率的關鍵是感受態體菌的制備.感受態就是細菌吸收轉化因子的生狀態,只有發展為感受態的細胞才能穩定攝取外來的DNA分子. pUC18的LacZ基因區域當有dna片段插入時,LacZ基因失活,轉化進入大腸桿菌并在含有IPTG和X-gal培養基生長時,會產生白色的克隆,不含插入片段的pUC18質粒進入宿主細胞生成藍色菌落.

DNA分子轉化分以下幾步：

1、 吸附--雙鏈DNA分子吸附于受體菌表面;

2、 轉入--雙鏈DNA分子解鏈.一條鏈進入受體菌,另一條降解;

3、 自穩--外源質粒dna分子在細胞內復制成雙鏈;

4、 表達一供體基因隨同復制子同時復制,分裂, 轉錄翻譯.

實驗試劑：

LB培養基

質粒DNA(含Amp抗生基因),受體菌

CaCl2 0.1M

Amp

實驗過程：

1、感受態細胞制備及CaCl2處理：

1) 將宿主菌在瓊脂培養基平板上劃線,37℃培養16～20小時.

2) 挑取單菌落轉入20mL LB培養基錐瓶中,37℃振蕩過夜.

3) 從中取2mL菌液轉入50mL LB培養基中37℃振蕩培養4-5小時,測OD100達0.4～0.5.

4) 培養物于冰上10分鐘.

5) 轉入-50mL離心管,于4000rpm下4℃離心10分鐘.

6) 棄上清,倒置離心管1分鐘,流盡剩余殘液然后加入10ml用冰預冷的 0. 1mol/L CaCl2,置冰上10分鐘.

7) 4,000rpm 4℃離心10分鐘,棄上清.

8) 加入2ml,0.1M CaCl2懸浮細胞,于4℃過夜.