DNase I Solution (RNase & Protease-free)
脫氧核糖核酸酶I溶液（無RNase&蛋白酶）
關(guān)鍵詞：
Deoxyribonucleate 5 –Oligonucleotidohydrolase，5′-寡核苷酸-水解酶，Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas，EC No: 3.1.21.1，CAS NO：9003-98-9
訂購信息【現(xiàn)貨供應(yīng)】
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價(jià)格（元) |
DNase I Solution (RNase & Protease-free) 脫氧核糖核酸酶I溶液（無RNase &蛋白酶） | MF0405-200U | 200U | -20oC | 298 |
MF0405-1000U | 1000U | -20oC | 1348 |
【溫馨提示】：蛋白樣品制備中核酸酶的降解推薦使用全能型的全能核酸酶Benzonase Nuclease，點(diǎn)擊此處了解全能核酸酶的亮點(diǎn)在哪？
產(chǎn)品描述
脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，在大多數(shù)細(xì)胞和組織中都能發(fā)現(xiàn)的一種核酸內(nèi)切酶，偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵，產(chǎn)生5’端為磷酸基團(tuán)、3’端為羥基的多聚核苷酸，平均消化產(chǎn)物最小為多聚四核苷酸。Mg2+存在條件下，DNase I可隨機(jī)識別和切斷DNA任一條鏈上的任意位點(diǎn)；而在Mn2+存在條件下，DNase I識別DNA的兩條鏈并在幾乎相同的位點(diǎn)進(jìn)行切割。DNase I可水解多種形式DNA，如單鏈DNA、雙鏈DNA，甚至染色質(zhì)（其切割速率受組蛋白影響）。
脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，最早從胰腺中分離而來，至今哺乳動物胰腺也是最主要的來源之一。DNase I以兩對二硫鍵結(jié)合的多種糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范圍是pH 7-8，DNase的活性依賴于Ca2+，并可被二價(jià)金屬離子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保護(hù)酶使其不被水解，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原來的1/2。
本品是即用型溶液形式的DNase I，不含RNase和蛋白酶，適用于各種RNA處理。另外還提供實(shí)驗(yàn)所需的反應(yīng)緩沖液和終止液，節(jié)省時(shí)間且用起來更方便。
產(chǎn)品應(yīng)用
◇ 制備不含DNA的RNA樣本；
◇ RT-PCR反應(yīng)前RNA樣本內(nèi)基因組DNA等可能存在DNA污染的去除；
◇ T7，T3，SP6等RNA聚合酶催化的體外RNA轉(zhuǎn)錄后DNA模板的去除；
◇ DNase I足跡法（DNase I footprinting）研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用；
◇ 缺口平移法標(biāo)記探針用；
◇ 制備隨機(jī)DNA片段文庫；
◇ TUNEL細(xì)胞凋亡檢測中用于剪切DNA制備陽性對照；
產(chǎn)品包裝
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規(guī)格） | |
MF0405-200U | MF0405-1000U | ||
MF0405-A | DNase I Solution (RNase & Protease-free) | 200U | 1000U |
MF0405-B | 10×Reaction Buffer | 200μl | 1ml |
MF0405-C | 10×Stop Solution | 200μl | 1ml |
保存與運(yùn)輸方法
保存：-20℃凍存，1年穩(wěn)定。
運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。
注意事項(xiàng)
1） 本DNase I的儲存緩沖液為50mM Tris-acetate(pH 7.5)，10mM CaCl2，50%(v/v) glycerol。如需對其進(jìn)行稀釋，則使用本儲存緩沖液進(jìn)行稀釋。
2） 酶的使用過程中需放在冰盒或冰浴內(nèi)，使用結(jié)束立即放回-20℃保存。
3） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、RT-PCR反應(yīng)前RNA樣本內(nèi)DNA污染的去除
1.1 DNA模板經(jīng)核酸內(nèi)切酶線性化，用酚/氯仿和氯仿/異丙醇提取DNA，用乙醇沉淀后，溶于適量無菌去離子水中。
1.2 往一個(gè)RNase-free EP管內(nèi)依次加入下列試劑：
RNA樣本 | 1μg |
10×Reaction Buffer | 1μl |
用DEPC-treated Water補(bǔ)充 | 至9μl |
DNase I (1U/μl) | 1μl |
【注意】：如果需要處理較大量的RNA樣品，可按比例放大上述反應(yīng)體系。條件許可下最好往體系內(nèi)加入適量RNase抑制劑（貨號：MF0218-2KU）以防止RNA降解。
1.3 37℃孵育30min。
1.4 往上述體系內(nèi)加入1μl 10× Stop Solution使其終濃度為1×，混勻。之后65℃孵育10min使DNase I失活。【注意】：一定要先加入10× Stop Solution，然后再加熱失活RNase I，否則先加熱可能引起RNA被降解。
1.5 加熱處理后的RNA樣品即可直接用作RT-PCR反應(yīng)用的模板。
二、體外RNA反轉(zhuǎn)錄后模板DNA的去除
2.1 每個(gè)含有0.5μg模板DNA的反轉(zhuǎn)錄體系中加入1U DNase I，某些情況下模板DNA完quan消化所需的DNase I需通過實(shí)驗(yàn)來摸索。
2.2 37℃孵育15min。
2.3 酚/氯仿抽提失活DNase I。
三、其他用途請參考上述方法或參考文獻(xiàn)等進(jìn)行。
相關(guān)產(chǎn)品
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
MF0402-10MG | Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein | 10MG |
MF0401-15KU | Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥2,000 units/mg protein | 15KU |
MF0405-200U | DNase I Solution (RNase & Protease-free) 脫氧核糖核酸酶I溶液 | 200U |
MF0203-100MG | Ribonuclease A (RNase A) from Bovine Pancreas | 100mg |
MP1509-25KU | Benzonase Nuclease 全能核酸酶 | 25KU |
MF0201-100MG | Proteinase K, Molecular Biology Grade蛋白酶K | 100mg |
MF0218-2KU | RNase Inhibitor (40U/µl), Murine小鼠RNA酶抑制劑 | 2KU |
MF0404-500ML | DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水（無DNase、RNase ) | 500ml |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
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