人高遷移率族蛋白A1（HMGA1）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒

本試劑盒僅供研究使用。
 

人高遷移率族蛋白A1（HMGA1）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒

檢測范圍：5μg/L -300μg/L

人高遷移率族蛋白A1（HMGA1）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒

使用目的：
　　本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中高遷移率族蛋白A1（HMGA1）含量。
實驗原理
　　本試劑盒應用雙抗體抗原夾心法測定標本中人高遷移率族蛋白A1（HMGA1）水平。用純化的人高遷移率族蛋白A1（HMGA1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入高遷移率族蛋白A1（HMGA1），再與HRP標記的高遷移率族蛋白A1（HMGA1）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的高遷移率族蛋白A1（HMGA1）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人高遷移率族蛋白A1（HMGA1）濃度。
試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（480μg/L） 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
240μg/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
120μg/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
60μg/L 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
30μg/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
15μg/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結：

計算
　  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
P6342-25g Pararosaniline base 副品紅堿（不含吖啶衍生物） [467-62-9] 25g
P714181-1g Paromomycin sulfate salt 硫酸* [1263-89-4] 1g
P714181-5g Paromomycin sulfate salt 硫酸* [1263-89-4] 5g
P6706-5mg Patulin from Penicillium expansum 棒曲霉素 [149-29-1] 5mg
P6707-5mg Paxilline*, from Penicillium paxilli [57186-25-1] 5mg
PD0100-1pk PBS Powdered 即用型PBS粉劑 / 1pk
PD0435-50T（片） PBS Powdered 即用型PBS片劑 / 50T（片）
P4491-1pk PBS Blocking Buffer with Non-Fat Milk Premixed Powder 即用型粉劑 / 1pk
P4481-1pk PBS Blocking Buffer with BSA Premixed Powder 即用型粉劑 / 1pk
PB0685-25g Pectin from citrus peel 果膠 [9000-69-5] 25g