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Hoechst 33342染色液的使用方法

2021年01月22日 16:29西安齊岳生物科技有限公司點擊量:6481

Hoechst 33342,也稱bisBenzimide H 33342HOE 33342,是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料,對細胞的性較低。Hoechst 33342染色常用于細胞凋亡檢測,染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst 33342也常用于普通的細胞核染色,或常規的DNA染色。Hoechst 33342的大激發波長為346nm,大發射波長為460nmHoechst 33342和雙鏈DNA結合后,大激發波長為350nm,大發射波長為461nm。Hoechst 33342染色液為即用型,可直接用于固定細胞或的細胞核染色,也可直接用于活細胞或的細胞核染色。

使用說明:

1. 對于固定的細胞或:

a. 對于細胞或樣品,固定后,適當洗滌固定劑。隨后如果需要進行熒光染色,則行熒光染色,染色完畢后再按后續步驟進行Hoechst 33342染色。如果不需要進行其它染色,則直接進行后續的Hoechst 33342染色。

b. 對于貼壁細胞或切片,加入少量Hoechst 33342染色液,覆蓋住樣品即可;對于懸浮細胞,至少加入待染色樣品3倍體積的染色液,混勻。室溫放置3-5分鐘。

c. 吸除Hoechst 33342染色液,用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次,每次3-5分鐘。

d. 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細胞發生凋亡時,會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染,或呈碎塊狀致密濃染。

2. 對于活細胞或:

a. 加入適當量Hoechst 33342染色液,充分覆蓋住待染色的樣品,通常對于六孔板一個孔需加入1ml染色液,對于96孔板一個孔需加入100微升染色液。

b. 在適宜于細胞培養的溫度下培養20-30分鐘。棄染色液,用PBS或培養液洗滌2-3次即可進行熒光檢測。

注意事項:

熒光染料都存在淬滅的問題,為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光衰減封片劑。建議染色后盡量完成檢測,活細胞或染色后應立即觀察。

為了您的和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

 
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