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看影響試劑盒檢測(cè)效果的幾大因素

2016年01月29日 10:13上海撫生實(shí)業(yè)有限公司點(diǎn)擊量:497

elisa試劑盒質(zhì)量保證是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,許多重要的環(huán)節(jié)都影響到檢測(cè)的效果: 一、方法學(xué)的影響 ELISA測(cè)定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競(jìng)爭(zhēng)抑制法,其中競(jìng)爭(zhēng)抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時(shí)差所引起的不公平競(jìng)爭(zhēng)等因素的影響,結(jié)果重復(fù)性較差,質(zhì) 量較難控制。elisa試劑盒  二、試劑因素 不同批次的ELISA試劑在制作過(guò)程中很難保證質(zhì)量*一致,即使是通過(guò)批批檢的項(xiàng)目其檢測(cè)結(jié)果也存在差異,因此必須選擇和訂購(gòu)長(zhǎng)批號(hào)的試劑,并保證保存條 件。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號(hào)改變而新建立質(zhì)控體系及重新評(píng)估試劑的復(fù)雜過(guò)程,并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性;對(duì)于效期短、使用率低的試劑,當(dāng)小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。 1、避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。 2、實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。 3、不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。  三、樣本因素 標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素,前者包括類(lèi)風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、*等,后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。將抗原或抗體固定在過(guò)程稱(chēng)為包被(coating)。換言之,包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過(guò)程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載elisa試劑盒 體是通過(guò)物理吸附結(jié)合 的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用于。這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。載體對(duì)不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán),故更易吸附到固相載體表面。IgG對(duì)聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附 力,其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上,抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外,因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。例如,在檢測(cè)抗DNA抗體時(shí),需用DNA作為包被抗原,而普遍的固載體一般不能直接與核酸結(jié)合。 可將聚苯乙烯板先經(jīng)紫外線照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時(shí)),以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質(zhì),如聚賴(lài)氨酸、*等作預(yù)包 被,也可提高核酸的結(jié)合力。也可 用親和素*系統(tǒng)作間接包被,即用親和素先包被載體,然后加入*化的DNA,這種包被方法均勻、牢固,已擴(kuò)大應(yīng)用于 各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。

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