產(chǎn)品名稱:BRL 3A細(xì)胞,大鼠肝細(xì)胞*
基本特性:
細(xì)胞數(shù)量:100萬個(gè)細(xì)胞數(shù)
細(xì)胞傳代:到客戶手上是3代以內(nèi)的
細(xì)胞是一個(gè)獨(dú)立有序的、能夠進(jìn)行自我調(diào)控的結(jié)構(gòu)與功能體系。每一個(gè)細(xì)胞都具有一整套完整的裝置以滿足自身代謝的需要。單細(xì)胞生物能夠獨(dú)立地進(jìn)行全部的生命活動(dòng)。在多細(xì)胞生物中,盡管每一個(gè)細(xì)胞的功能受到整體的協(xié)調(diào)與控制,但每一個(gè)細(xì)胞都是一個(gè)獨(dú)立的、自我控制的、高度有序的代謝系統(tǒng),有相對(duì)獨(dú)立的生命活動(dòng),各種組織都是以細(xì)胞為基本單位來執(zhí)行特定的功能,整個(gè)機(jī)體的新陳代謝活動(dòng)都是以細(xì)胞為單位協(xié)調(diào)地進(jìn)行的。
只要具備合適的生存條件,每一個(gè)分離的細(xì)胞都可以在體外生長(zhǎng)繁殖,表現(xiàn)出生命的特征。
體外培養(yǎng)的細(xì)胞直接生活在培養(yǎng)基中,因此培養(yǎng)基應(yīng)能滿足細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分、促生長(zhǎng)因子、激素、滲透壓、pH等諸多方面的要求。
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
凍存液是20%FBS+10%DMSO+70%培養(yǎng)基。

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下面是有關(guān)細(xì)胞株,菌株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù):
1. 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,無菌室及無菌操作臺(tái)(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,以70 % ethanol 擦拭無菌操作臺(tái)面,并開啟無菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后,才開始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株,且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后,將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái),以70 % ethanol 擦拭無菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上后,再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。
2. 無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管、吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置,其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出,以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在臺(tái)面的*無菌區(qū)域,勿在邊緣的非無菌區(qū)域操作。
3. 小心取用無菌的實(shí)驗(yàn)物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或容器瓶口,亦不要在打開的容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45° 角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
4. 工作人員應(yīng)注意自身的安全,須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來自人類或是病毒感染的細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作,并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無菌操作臺(tái)(至少Class II)。操作過程中,應(yīng)避免引起aerosol 的產(chǎn)生,小心毒性藥品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖銳針頭的傷害等。
5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目:
5.1. CO2 鋼瓶的CO2 壓力
5.2. CO2 培養(yǎng)箱的CO2 濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,每周更換)。
5.3. 無菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow 壓力,定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜,預(yù)濾網(wǎng)(300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng),3000 小時(shí)/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),定期更換水槽的水.
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