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技術(shù)文章

雞新城疫抗原(NDV Ag)Elisa試劑盒

閱讀:289發(fā)布時(shí)間:2014-10-17


   雞新城疫抗原(NDV Ag)Elisa試劑盒操作步驟
1.
編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1
孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.
加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50μl。然后在待測(cè)樣品孔先
加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不
觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3.
溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.
配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5 次,拍干。
6.
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
7.
溫育:操作同 3。
8.
洗滌:操作同 5。
9.
顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。


   雞新城疫抗原(NDV Ag)Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中雞傳新城疫抗原(NDV Ag)表達(dá)。用純化的抗體包
被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中新城疫抗原(NDV Ag)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合
的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗
滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終
的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),與 CUTOFF 值相比較,從而判定
標(biāo)本中雞新城疫抗原(NDV Ag)的存在與否


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