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恒遠文獻：阿魏酸鈉對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護
閱讀：988 發布時間：2020-1-10阿魏酸鈉對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護
劉 輝，楊初蔚，劉宇飛 ( 大連醫科大學附屬第二醫院急診科，遼寧 大連 116023)
［摘 要］ 目的 探討阿魏酸鈉對大鼠心肌缺血再灌注模型心肌功能的影響。方法 選取 60 只 7 ～ 8 周齡［平均( 7． 26 ± 0． 36)周］SD 大鼠，隨機平均分為假手術組、心肌再灌注組以及阿魏酸鈉組，每組 20 只; 比較灌注后各組大鼠心肌功能指標的變化情況。結果 與假手術組比較，再灌注組以及阿魏酸鈉組的左室舒張末壓( LVESP) 、大鼠心室大壓力( ± dp /dmax) 顯著下降，差異具有統計學意義( P ＜ 0． 05) ; 再灌注 2 h 時 LVESP、± dp /dmax 的下降程度再灌注組明顯高于阿魏酸鈉組，差異具有統計學意義( P ＜ 0． 05) ;各組大鼠的 LVEDP 與假手術組比較，呈升高趨勢，再灌注 2 h 后，阿魏酸鈉組明顯低于再灌注組，差異具有統計學意義( P ＜ 0． 05) ;與假手術組比較，再灌注組與阿魏酸鈉組的大鼠凋亡細胞比例明顯升高，阿魏酸鈉組 Fas 陽性表達比例明顯低于再灌注組，差異均具有統計學意義( P ＜ 0． 05) ; 大鼠血液中 LDH 以及 CK-MB 的含量均明顯升高，再灌注組明顯高于阿魏酸鈉組，差異具有統計學意義( P ＜ 0． 05) ; 與假手術組比較，心肌再灌注組和阿魏酸鈉組 SOD 含量明顯降低，但阿魏酸鈉組的降低程度低于再灌注組，差異具有統計學意義( P ＜ 0． 05) ; 而 MDA 的含量卻上升，但阿魏酸鈉組的升高程度低于再灌注組，差異具有統計學意義( P ＜ 0． 05) 。結論 阿魏酸鈉在一定程度上可以恢復心肌再灌注模型大鼠心肌功能的損傷。
［關鍵詞］阿魏酸鈉; 心肌缺血再灌注; 心肌功能; 損傷; 保護
心肌梗死是一種嚴重的冠狀動脈并發癥，冠狀動脈內的血液供應量大大減少，甚至發生血液循環阻斷，導致心肌血液供給不足，引發心肌細胞、組織發生嚴重的病變［1］。心肌缺血再灌注是指心臟或心肌組織在受到缺血性損傷之后，由于冠狀動脈血管阻塞的減輕或者粥樣斑塊消融，引起血管內的血液重新灌注進入心臟［2］，對心肌組織和心臟造成了進一步的損傷。如何降低心肌缺血再灌注對心肌的損傷、降低死亡率是醫學領域亟待解決的難題之一［3］。阿魏酸鈉具有很好的抗血小板凝集作用，但對其在心肌缺血再灌注中的作用研究較少［4］。本研究中，我們采用 Longa 法建立了3 h腦缺血再灌注的大鼠模型，能夠準確控制缺血和再灌注的部位和時間，可控性較強，并對該模型大鼠使用阿魏酸鈉療，分析其對大鼠缺血、心肌酶含量以及心功能的影響，以期為心肌缺血再灌注損傷的治療提供實驗依據。
1 材料與方法
1． 1 儀器、藥品及動物
美國 Harvard 公司的 microvent 動物呼吸機; 動物手術臺; 高像素相機; 針管、手術刀等*儀器。阿魏酸鈉( 重慶萊美藥業股份有限公司生產，規格: 0． 1 克/支，生產批號: 20140523) ; 伊文思藍( 上海恒遠生物科技有限公司，規格為試劑級，生產批號: 20141221) ; TTC( 上海寶曼生物科技有限公司，規格為試劑級，生產批號:20140916) 等*藥品。選取年齡為 7 ～ 8 周［平均( 7． 26 ± 0． 36) 周］SD 大鼠( 由我院動物實驗中心提供，在正常條件先飼養，動物合格證編號: 20140265)60 只，體質量 220 ～ 260 g，平均( 241． 26 ± 21． 45) g。隨機將其均分成 3 組，每組 20 只。
1． 2 方法
1． 2． 1 模型的建立 大鼠處于空腹狀態，以50 g /L的水合氯醛作為麻醉劑，按 0． 66 mL /kg 注射到大鼠的體內，待其*麻醉后仰臥位固定。然后分別接入動物呼吸機以及心電監護儀，在大鼠的xong部左側大約第5 根肋骨處縱向切開，將大鼠的胸腔打開后經心包挑起，使大鼠心臟*暴露，觀察肺動脈圓錐和左心耳中間位置，并在左心耳下部大約 1 cm 的位置采用魚線型進針和穿線，并且使用較小的硅膠管從魚線的兩端位置進行傳入，觀察監護儀指標，待其達到穩定后結扎，如果很快出現脈搏減弱、左心室心肌顏色發白，并且其心電圖的 ST 段顯著抬高，表示結扎已經成功。在30 min以后持續對大鼠灌注 3 h，觀察心電監護情況，若心電圖的 ST 段出現 50% 以上的回落則認為缺血再灌注模型建立成功［5］。假手術組大鼠只進行胸腔打開，然后進行穿線即可，無需進行結扎。在建模之前1 周，阿魏酸鈉組大鼠給予注射用阿魏酸鈉 15 mg /kg靜脈注射，對假手術組以及灌注組大鼠則在同一時間點采取相同的方式注射同體積的生理鹽水。
1． 2． 2 血液樣本取得 在實驗完成后，再次對大鼠的左前降支( LAD) 進行結扎，并在其右側頸靜脈注射2 mL 的 3% 伊文思藍溶液后快速將大鼠的心臟摘除，將其放在 － 70 ℃ 冷凍 10 min 后切成厚度為1 mm的薄片，并將其在 37 ℃，濃度為 4% 的 2，3，5-氯化三苯基四氮唑( TTC) 中避光培養 15 min 后，放在濃度為 4% 甲醛中 24 h，然后用高像素數碼相機拍照后用軟件對缺血的程度以及梗死范圍進行測定［6］。
1． 3 觀察指標觀察指標包括: ① 在大鼠缺血之前、缺血以后30 min以及在灌注后 2 h 時觀察并記錄各組大鼠的心率( HＲ) 、左室舒張末壓( LVESP) 、左室收縮末壓( LVEDP) 以及大鼠心室大壓力上升、下降( ± dp /dmax)情況。②將各組大鼠的心肌組織在福爾馬林溶液中進行處理，然后對其進行免疫組化染色后計算 Fas 陽性表達情況。對各組大鼠的心肌組織進行 HE 染色，觀察心肌梗死情況。③對各組大鼠血液中的心肌酶情況進行測定: 血液樣本室溫靜置 30 min 后，進行離心處理獲得血清，嚴格根據試劑盒說明書測定大鼠血清中的超氧化物歧化酶( SOD) 、丙二醛( MDA) 、乳酸脫氫酶( LDH) 以及肌酸激酶同工酶( CK-MB) 含量情況。
1． 4 統計學方法采用 SPSS 18． 0 進行統計學處理，計量資料采用均數 ± 標準差( x珋± s) 表示，采用多因素方差分析，P ＜ 0． 05為差異有統計學意義
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