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溴化氰活化4B/6B瓊脂糖凝膠是一種活化中間體填料，它是通過溴化氰和瓊脂糖上面的羥基反應(yīng)生成活化的氰酸酯基團(tuán)。蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸等可以偶聯(lián)到溴化氰活化4B/6B瓊脂糖凝膠上。
它具有以下優(yōu)點(diǎn)：
偶聯(lián)條件溫和，效率高；可偶聯(lián)含有氨基的配體，應(yīng)用范圍廣。
產(chǎn)品指標(biāo)
產(chǎn)品牌號 | 溴化氰活化4B瓊脂糖凝膠 | 溴化氰活化6B瓊脂糖凝膠 |
基質(zhì) | seplite 4B | seplite 6B |
顆粒大小 | 平均粒徑90μm（50-160μm） | |
偶聯(lián)能力 | 20~60mgα-胰凝乳蛋白酶原/ml凝膠 | |
大線性流量 | 75cm/h（25℃），直徑1.6cm色譜柱，5cm柱床高 | |
高溫高壓 | 不耐受 | |
pH穩(wěn)定性 | 2–11 | |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 常見溶液中可以保持穩(wěn)定。可以耐受非離子型去污劑、變性溶劑，如8 M尿素和6 M鹽酸胍。也可以耐受50%二甲基甲酰胺和50%二氧六環(huán)等有機(jī)溶劑。 | |
保存 | 凍干粉，2~8℃，干燥 | |
使用注意事項(xiàng)：
溴化氰活化4B/6B瓊脂糖凝膠是以添加劑的形式凍干處理得到的。這些添加劑在填料螯合所需的配體前必須在低pH（pH 2–3）條件下進(jìn)行清洗。活化后的活性基團(tuán)也應(yīng)該使用低pH值（pH值2–3）保存，而在高pH值則會出現(xiàn)降解。
稱取所需量的凍干粉(1 g凍干粉可獲得3~5ml終體積的填料)，使用1mM HCl溶脹。填料會很快膨脹，再用1mM HCl在玻璃砂芯漏斗（G3）中進(jìn)行清洗15min。每克凍干粉添加約200ml 1mM的HCl溶脹，實(shí)際可以分次添加。
一般配體偶聯(lián)的過程如下：
（1）將所需要偶聯(lián)的配基溶解到 pH 8.3含有0.5mol/LNaCl的0.1mol/LNaHCO3 緩沖溶液中，加入溶脹好的溴化氰活化4B/6B瓊脂糖凝膠。
（2）在室溫中攪拌反應(yīng)2~4小時(shí)或者在4℃下過夜反應(yīng)。
（3）反應(yīng)*后，用5倍反應(yīng)體積的偶聯(lián)緩沖液洗滌掉其中多余的配體，10倍體積的水洗。
（4）將反應(yīng)完洗滌過的凝膠懸浮到水中，加入乙醇胺（1mol/L）或者pH8.0的Tris-HCl緩沖液，在常溫少攪拌反應(yīng)2小時(shí)，以消除殘余活性基團(tuán)。
（5）用含有0.5mol/LNaCl的0.1mol/L醋酸鹽緩沖液（PH 4.0）和含有0.5mol/LNaCl的0.1mol/L Tris-HCl緩沖液（PH 8）交替洗滌，至少重復(fù)以上循環(huán)洗滌3次。用10倍柱體積的PBS洗滌。
