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南京信帆生物技術有限公司 |  資料大小 |
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通用RT-PCR 試劑盒(M-MLV)
規格：25T/50T/100T
保存：-20℃保存，避免反復凍融，復檢期為1 年。
說明書1 份1 份1 份
產品簡介：
本試劑盒適用于各種RNA 制品的反轉錄反應以及隨后的PCR 擴增。它采用M-MLV 進行反轉錄反應，能夠
獲得較長的反轉錄產物。同時，在20ul 反轉錄體系和50ul PCR 反應體系中，還可以一次性得到足夠量的PCR 產物用于后續的克隆實驗。本試劑盒中配置的酶均為進口的酶。RT 酶采用進口的M-MLV，所以cDNA 更長，基因的信息保留得更完整！
反轉錄過程中特異的RNase 抑制劑可有效降低由于外源RNase 污染而導致實驗失敗的風險。本試劑盒使用方便、快捷，可廣泛用于cDNA 克隆及目的基因檢測等分子生物學實驗。
操作步驟：
一、反轉錄反應
1、在冰浴的無RNase 的離心管中加入如下反應成分：
1-5ug 總RNA 或50-500ng mRNA
2ul Oligo(dT)16 或2 pmole 基因特異性引物
補RNase-free ddH2O 至14.5ul
2、70℃保溫5min 后迅速在冰上冷卻2min，簡短離心收集反應液后加入以下各組分：
4ul 5×M-MLV Buffer
1ul dNTPs
0.5ul RNasin
1ul M-MLV
3、42℃溫浴60min，如果是用隨機引物，請先將離心管置25℃溫浴10min，再42℃溫浴60min。
4、95℃加熱5min 終止反應，置冰上進行后續實驗或-20℃保存。
5、用RNase-free ddH2O 將反應體系稀釋到50ul，取2-5ul 進行PCR 反應。
二、PCR 反應
1、按以下各組分配制50ul PCR 反應體系：
10×PCR Buffer 5ul
dNTPs 1ul
上游引物（用戶自備10um） 1ul
下游引物（用戶自備10um） 1ul
RT 反應產物2ul
Taq Polymerase 0.5ul
ddH2O x ul
Total Volume 50ul
2、混勻后短暫離心，PCR 儀擴增，瓊脂糖凝膠電泳觀察結果。
注意事項：
1、用于cDNA 合成反應的相關試劑和耗材盡可能用DEPC 進行處理，并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓
滅菌時，首先用經過滅菌的器具、水等配制溶液后，再將溶液進行過濾除菌處理。
2、試劑盒的各組分應在-20℃保存，避免反復凍融，有效期12 個月。
3、RNA 樣品要避免反復多次凍融，應使RNA 在冰浴中處于融化狀態。
