應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入，再與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。

　　在小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中，用直接法測(cè)定抗體，不能直接用酶符號(hào)測(cè)定抗體，然后直接加入底物。而要加酶標(biāo)抗抗體呢?

　　如果將酶符號(hào)應(yīng)用于待測(cè)抗體，直接法比經(jīng)典法更復(fù)雜，在探索符號(hào)條件時(shí)，不能保證抗體因誤操作而失活;酶標(biāo)二抗目前已較為常見(jiàn)，被規(guī)模化生產(chǎn)，購(gòu)買后使用方便。如果你直接做好了，方法已經(jīng)優(yōu)化了，d一抗二抗顯色，總時(shí)間加起來(lái)，結(jié)果不會(huì)超過(guò)2到3小時(shí)。

　　小鼠ELISA試劑盒可以使用直接ELISA法，即抗體包板用來(lái)在抗原上標(biāo)記酶，然后顯色，這與直接方法相比，減少了一步的時(shí)間，縮短了時(shí)間。然而，直接法和直接法各有優(yōu)缺點(diǎn)，其要求取決于實(shí)驗(yàn)的具體要求。

　　1、要檢測(cè)的抗體通常是免疫后產(chǎn)生的抗體。其中有免疫功能衰竭、抗體過(guò)少等因素存在。酶符號(hào)的使用存在許多不確定因素，如在使用酶符號(hào)之前無(wú)法測(cè)量效價(jià)的可能性，這會(huì)導(dǎo)致不必要的混淆。

　　2、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)中酶聯(lián)抗體與抗體結(jié)合后，小鼠ELISA試劑盒具有很強(qiáng)的信號(hào)放大作用，可使信號(hào)擴(kuò)增一千倍以上，適用于低抗體含量的測(cè)定。

　　3、直接酶標(biāo)記抗體在篩選出單克隆抗體后可以考慮，但測(cè)定系統(tǒng)的建立需要大量的工作。