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技術文章

犬白細胞分化抗原ELISA試劑盒

閱讀:388發(fā)布時間:2015-4-8

犬白細胞分化抗原ELISA試劑盒
實驗材料與試劑配制:
1. 儀器與材料:酶標儀(使用前預熱30分鐘,微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。
2. 洗液的配制:按 1:100的比例配制洗液備用。 樣品收集、處理及保存
1. 細胞培養(yǎng)上清:適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集上清液,以1000×g離心15
分鐘,收集上清。
2. 細胞:用PBS反復洗滌細胞 3次,調整細胞濃度達到10^4-10^6/ml左右,通過反復凍融,
使細胞破壞,并放出細胞內(nèi)成份。或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。
3. 血清: 在室溫 下, 血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。
4. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置 10 -20 分鐘后,
以1000×g離心15分鐘,收集上清。
5. 體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集 ,以 1000×g
離心、15 分鐘 ,收集上清。
6. 組織標本:切取 組織標本,稱取重量0.5mg加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,超聲破碎儀,
將標本勻漿,以2000 -300rmp離心 20 分鐘 ,收集上清進行檢測 。
7. 樣品 中不能含有 NaN3,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的( HRP)活性。
8. 保存 :如果樣品不能立即檢測,應將其分裝,-80 ℃保存,避免反復冷凍。保存過程中如出現(xiàn)
沉淀,應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高脂。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心
或過濾。不要在 37 ℃或更高的溫度加熱解 或更高的溫度加熱解 或更高的溫度加熱解或更高的溫度
加熱解或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解并確保樣品均勻地充分解凍。
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