當抗原材料中的干擾物質不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體比賽與固相抗原結合。

標本中抗體量越多，結合在固相上的酶標抗體愈少，因而陽性反應呈色淺于陰性反應。如抗原為高純度的，可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質，直接包被不易成功，可選用捕獲包被法，即先包被與固相抗原相應的抗體，然后參與抗原，構成固相抗原。

洗刷除去抗原中的雜質，然后再加標本和酶標抗體進行比賽結合反應。比賽法測抗體有多種形式，可將標本和酶標抗體與固相抗原比賽結合，抗HBc 。

ELISA一般選用此法。另一種形式為將標本與抗原一起參與到固相抗體中進行比賽結合，洗刷后再參與酶標抗體，與結合在固相上的抗原反應。抗HBe的檢測一般選用此法。 

小分子抗原或半抗原因缺少可作夾心法的兩個以上的位點，因而不能用雙抗體夾心法進行測定，可以選用比賽法形式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原比賽與固相抗體結合。