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微生物實驗室常用的培養(yǎng)基制備、貯存及質(zhì)量控制方法
閱讀：51 發(fā)布時間：2025-1-15培養(yǎng)基可按處方配制，也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。
在制備培養(yǎng)基時，應(yīng)選擇質(zhì)量符合要求的脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分進(jìn)行配制。脫水培養(yǎng)基應(yīng)附有處方和使用說明，配制時應(yīng)按使用說明上的要求操作以確保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求，不得使用結(jié)塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基。脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分應(yīng)在適當(dāng)?shù)臈l件下儲存，如低溫、干燥和避光，所有的容器應(yīng)密封，尤其是盛放脫水培養(yǎng)基的容器。商品化的成品培養(yǎng)基除了應(yīng)附有處方和使用說明外，還應(yīng)注明有效期、貯存條件、適用性檢查試驗的質(zhì)控菌和用途。
為保證培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定可靠，各脫水培養(yǎng)基或各配方組分應(yīng)準(zhǔn)確稱量，并要求有一定的精確度。配制培養(yǎng)基的溶劑是純化水，特殊情況下，可能需要用去離子水和蒸餾水。應(yīng)記錄各稱量物的重量和水的使用量。配制培養(yǎng)基所用容器和配套器具應(yīng)潔凈，可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質(zhì)的殘留。對熱敏感的培養(yǎng)基如糖發(fā)酵培養(yǎng)基其分裝容器一般應(yīng)預(yù)先進(jìn)行滅菌，以保證培養(yǎng)基的無菌性。
脫水型培養(yǎng)基應(yīng)溶解于水中，再行分裝與滅菌。配制時若需要加熱助溶，應(yīng)注意不要過度加熱，以避免培養(yǎng)基顏色變深。如需要添加其它組分時，加入后應(yīng)充分混勻。
應(yīng)按照生產(chǎn)商提供或使用者驗證的參數(shù)進(jìn)行培養(yǎng)基的滅菌。商品化的成品培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方法的資料。培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術(shù)，特殊培養(yǎng)基可采用薄膜過濾除菌。
培養(yǎng)基若采用不適當(dāng)?shù)募訜岷蜏缇鷹l件，有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或 pH 的改變。因此，培養(yǎng)基應(yīng)采用驗證的滅菌程序滅菌，培養(yǎng)基滅菌方法和條件，應(yīng)通過無菌性試驗和促生長試驗進(jìn)行驗證。此外，對高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗證，以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導(dǎo)致培養(yǎng)基的過熱，過度滅菌可能會破壞絕大多數(shù)的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)基促生長的質(zhì)量。滅菌器中培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此，應(yīng)根據(jù)滅菌培養(yǎng)基的特性，進(jìn)行全面的滅菌程序驗證。,
應(yīng)確定每批培養(yǎng)基滅菌后的 pH（冷卻至室溫 25℃測定）。若培養(yǎng)基處方中列出 pH 的范圍，除非經(jīng)驗證表明培養(yǎng)基的 pH 允許的變化范圍很寬，否則，pH的范圍不能超過規(guī)定的±0.2。
制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行下列檢查：容器和蓋子不得破裂，裝量應(yīng)相同，盡量避免形成氣泡，固體培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪，在冷藏溫度下不得形成結(jié)晶，不得污染微生物等。應(yīng)檢查和記錄批數(shù)量、有效期及培養(yǎng)基的無菌檢查。
培養(yǎng)基的貯存
自配的培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記名稱、批號、配制日期等信息，并在已驗證的條件下貯藏。商品化的成品培養(yǎng)基標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)有名稱、批號、生產(chǎn)日期、失效期及培養(yǎng)基的有關(guān)特性，生產(chǎn)商和使用者應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基使用說明書上的要求進(jìn)行保存，所采用的保藏和運輸條件應(yīng)使成品培養(yǎng)基限度的失去水分并提供機(jī)械保護(hù)。
培養(yǎng)基滅菌后若儲藏在高壓滅菌器中，質(zhì)量可能會受影響，一般不提倡這種存放法。瓊脂培養(yǎng)基不得在 0℃或 0℃以下存放，因為冷凍可能破壞凝膠特性。
培養(yǎng)基應(yīng)避光保存，若要長期保存，應(yīng)置于密閉容器中以防止水分流失。瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如置冰箱保存，一般不超過一周，且應(yīng)密閉包裝，若延長保存，保存期需經(jīng)驗證確定。
固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許一次，以避免因過度受熱造成培養(yǎng)基質(zhì)量下降或微生物污染。培養(yǎng)基的再融化一般采用的水浴加熱或流通蒸汽。若使用微波爐，應(yīng)避免培養(yǎng)基過度受熱及水分的蒸發(fā)，更要注意安全。融化的培養(yǎng)基應(yīng)置于 45～50℃的水浴中，不得超過 8 小時。傾注培養(yǎng)基時，應(yīng)擦干培養(yǎng)基容器外表面的水分，避免容器外壁的水滴進(jìn)入培養(yǎng)基中造成污染。
使用過的培養(yǎng)基（包括失效的培養(yǎng)基）應(yīng)按照國家污染廢物處理相關(guān)規(guī)定進(jìn)行處理。
培養(yǎng)基的質(zhì)量控制試驗
實驗室應(yīng)對試驗用培養(yǎng)基建立質(zhì)量控制程序（也就是要有培養(yǎng)基質(zhì)控sop），以確保所用培養(yǎng)基質(zhì)量符合相關(guān)檢測的需要。
實驗室配制或商品化的成品培養(yǎng)基的質(zhì)量依賴于其制備過程，采用不適宜方法制備的培養(yǎng)基將影響微生物的生長或復(fù)蘇，從而影響試驗結(jié)果的可靠性。
配制好的培養(yǎng)基應(yīng)定期進(jìn)行質(zhì)量控制試驗。實驗室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項目是 pH，適用性檢查試驗，定期的穩(wěn)定性檢查以確定有效期。培養(yǎng)基在有效期內(nèi)應(yīng)依據(jù)適用性檢查試驗確定培養(yǎng)基質(zhì)量是否符合要求。有效期的長短將取決于在一定存放條件下（包括容器特性及密封性）的培養(yǎng)基其組成成分的穩(wěn)定性。
在實驗室中，若采用已驗證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗可只進(jìn)行一次，試驗的菌種可根據(jù)培養(yǎng)基的用途從相關(guān)附錄中進(jìn)行選擇，也可增加從生產(chǎn)環(huán)境及產(chǎn)品中常見的污染菌株。培養(yǎng)基的質(zhì)量控制試驗若不符合規(guī)定，應(yīng)尋找不合格的原因，以防止問題重復(fù)出現(xiàn)。任何不符合要求的培養(yǎng)基均不能使用。
用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護(hù)。用于關(guān)鍵區(qū)域監(jiān)控的培養(yǎng)基最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
其實在我們微生物實驗室，培養(yǎng)基的質(zhì)控一直都是很多實驗室很困擾的一個問題，好好研讀GB 4789.28-2013 《培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》，相信對大家還是很有幫助的。