紅螯光殼螯蝦卵黃脂磷蛋白/卵黃磷蛋白(Lv/Vn)ELISA試劑盒本試劑盒僅供研究使用
操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
240ng/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
120ng/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
60ng/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
30ng/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15ng/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測(cè)樣品10µl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50µl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計(jì)算
紅螯光殼螯蝦卵黃脂磷蛋白/卵黃磷蛋白(Lv/Vn)ELISA試劑盒以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
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