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技術文章

閱讀：887發布時間：2020-3-3

PEI實驗使用注意事項

質粒質量：請務必使用高質量轉染級無內毒素質粒。通過260 nm光吸收測定DNA 濃度，260nm / 280nm比值確定 DNA 純度（比值應該在1.8～2.0的范圍之內）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。

細胞條件：使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養基沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的胎牛血清培養細胞。

特別提醒

1. 對于某些類型的細胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 細胞，在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉染時細胞的匯合度仍為70～80%。

2. 對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。

3. 即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復合物仍能轉染細胞，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。

4. PEI對大多數細胞來而言，每 1μg DNA 使用 3.0 μL EZ Trans試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每 1 μg DNA使用 1～4μL體積線性PEI轉染試劑進行優化。

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