豬流感病毒通用型(SIV-U) 核酸檢測試劑盒圖片PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；剛開始時, 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。

豬流感病毒通用型(SIV-U) 核酸檢測試劑盒圖片個標(biāo)準(zhǔn)品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。亦可以OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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豬流感病毒通用型(SIV-U) 核酸檢測試劑盒圖片1、什么是定量PCR？
以參照物為標(biāo)準(zhǔn)，對PCR終產(chǎn)物進(jìn)行分析或?qū)?/span>PCR過程進(jìn)行監(jiān)測，從而達(dá)到評估樣本中靶基因的拷貝數(shù)，稱為定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR擴(kuò)增的指數(shù)期進(jìn)行的。
2、定量PCR定量的理論依據(jù)是什么？
特定的待擴(kuò)增基因片段起始含量越大，則指數(shù)擴(kuò)增過程越短，當(dāng)擴(kuò)增速率趨于穩(wěn)定后，則無論原來樣品中起始模板含量多少，終擴(kuò)增片段的含量通常是一樣的。
理想的擴(kuò)增結(jié)果：Y=X×2n 其中Y代表擴(kuò)增產(chǎn)物量， X代表PCR反應(yīng)體中的原始模板數(shù) n為擴(kuò)增次數(shù)；理論上PCR擴(kuò)增效率為*，PCR產(chǎn)物隨著循環(huán)的進(jìn)行成指數(shù)增長，但實際上：DNA的每一次復(fù)制都不*，即每一次擴(kuò)增中，模板不是呈2的倍增長；實際應(yīng)為：Y= X(1+E)n ，其中E 代表擴(kuò)增效率：E = 參與復(fù)制的模板/總模板，通常E≤1，E在整個PCR擴(kuò)增過程中不是固定不變的。通常X 在 1～105拷貝、循環(huán)次數(shù)n≤30時，E 相對穩(wěn)定，原始模板以相對固定的指數(shù)形式增加，適合定量分析，這也就是所謂的指數(shù)期；隨著循環(huán)次數(shù)n的增加（>30次），E值逐漸減少，Y 呈非固定的指數(shù)形式增加，后進(jìn)入平臺期。
3、熒光定量PCR定量的理論模式又是什么？
PCR是對原始待測模板核酸的一個擴(kuò)增過程，任何干擾PCR指數(shù)擴(kuò)增的因素都會影響擴(kuò)增產(chǎn)物的量，使得PCR擴(kuò)增終產(chǎn)物的數(shù)量與原始模板數(shù)量之間沒有一個固定的比例關(guān)系，通過檢測擴(kuò)增終產(chǎn)物很難對原始模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量。近年來研究人員通過大量的實踐，研究了相對準(zhǔn)確的定量PCR方法，即熒光定量PCR。
PCR擴(kuò)增通式： ① Tn=T0（1+E）n
② Tn=Tn-1（1+E）n 注：[0
其中E表示擴(kuò)增效率，n為循環(huán)數(shù)，Tn表示在n個周期后PCR產(chǎn)物的數(shù)量，Tn-1表示在n-1個周期后PCR產(chǎn)物的數(shù)量，T0為原始模板數(shù)量。設(shè)定PCR到達(dá)指數(shù)擴(kuò)增期時，產(chǎn)生一定的熒光(熒光依賴于某一循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物的總量，即特定的拷貝數(shù)K，為常數(shù)，大約在1010左右)高于背景為儀器所識別，此時的循環(huán)數(shù)為CP（crossing point）,也就是K= T0（1+E）CP，取對數(shù)即：
lg K=lg T0+CP*lg(1+E)
CP=- 1/lg(1+E)*lg T0 +lgk/lg(1+E)
由于對一特定的PCR而言，E與K均為常數(shù)，故上式為循環(huán)數(shù)（CP）對原始模板拷貝數(shù)的對數(shù)（lg T0）一次方程，其標(biāo)準(zhǔn)形式y=kx+b,該直線的斜率為- 1/lg(1+E)，在橫坐標(biāo)上的截距為lgk/lg(1+E)，也是熒光定量PCR所謂的標(biāo)準(zhǔn)曲線。例如下圖為單管實時熒光定量RT-PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線：
豬流感病毒通用型(SIV-U) 核酸檢測試劑盒圖片目前熒光定量PCR均采用外標(biāo)定量
外標(biāo)法定量PCR擴(kuò)增效率的計算，由于標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率(Slope)為- 1/lg(1+E)，可知E=10-1/Slope-1 ,如從標(biāo)準(zhǔn)曲線中知道Slope=-3.337,則可推知擴(kuò)增效率E=101/3。337-1=0.99,也有作者將(1+E)直接視為擴(kuò)增效率E，則E=10-1/Slope，求得的E值均在1—2之間，有時也有大于2的結(jié)果，如下圖所示。另外也可直接根據(jù)系列稀釋外標(biāo)在該次實時熒光PCR的結(jié)果來大略分析擴(kuò)增效率的高低，例如系列10倍稀釋外標(biāo)在PCR擴(kuò)增時有N2=N0En2, N3=(10*N0)En3,在擴(kuò)增到指數(shù)期時熒光值相同則代表此點的終末拷貝數(shù)相同，即N2=N3，En2-n3=10,取對數(shù)得到⊿ngE=1, E=101/⊿n，E=2，⊿n=3.32; E=1.8，⊿n=3.91.反之亦然。
根據(jù)PCR擴(kuò)增過程中是否加入某種標(biāo)記物、標(biāo)記物的種類以及后檢測的信號的不同可分為四種類型：①直接定量檢測法， ②同位素標(biāo)記定量，③酶標(biāo)記定量檢測法，④熒光定量PCR技術(shù)
熒光定量PCR 主要原理發(fā)射波長與受體熒光染料光染料吸收供體熒光傳遞的能量而激發(fā)出另一波長的熒光，同時將供體熒光淬滅。SYBR Green I 檢測模式
SYBR Green I 是一種能與雙鏈DNA 結(jié)合發(fā)光的熒光大增強(qiáng)。因此， SYBR Green I的檢測出PCR體系存在的雙鏈DNA數(shù)量。SYBR Green I 的大吸收波長約為497nm，發(fā)射波長大約為520nm。PCR擴(kuò)增程序一般為94℃～55℃～72℃三步法，40個循環(huán)。
SYBR Green I 的缺點：由于SYBR Green I沒有特異性，不能識別特定的雙鏈，只要是雙鏈就會結(jié)合發(fā)光，對PCR反應(yīng)中的非特異性擴(kuò)增或引物二聚體也會產(chǎn)生熒光，通常本所以在臨床上使用可能會有假陽性發(fā)生。 SYBR Green I的優(yōu)點：SYBR Green I的優(yōu)點是因為其缺點產(chǎn)生，由于它能所有的雙鏈DNA相結(jié)合，所以對不同模板不需特別定制不同的這對科研是很有利的，因此國內(nèi)外在科研中使用比較普遍。
5、為什么要用熒光定量PCR技術(shù)進(jìn)行定量？它與傳統(tǒng)的定量PCR有什么不同？
如前所述的，傳統(tǒng)的定量PCR有很多，主要是倍比稀釋法、內(nèi)參照法、競爭法、PCR-ELISA法，但這些定量PCR技術(shù)的難點主要在于：（1）如何確定PCR正處于線性擴(kuò)增范圍內(nèi)（只有在此范圍內(nèi)PCR產(chǎn)物信號才與初始模板的拷貝數(shù)成比例）。（2）一旦線性擴(kuò)增范圍確定以后，如何找到一個合適的方法檢測結(jié)果。為了保證線性，研究者要擴(kuò)增一系列梯度稀釋的cDNA或者對每個基因的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整；有的研究者加一個競爭性模板，有的做限制性的稀釋梯度分析，或者加一個PCR模擬（mimic）反應(yīng)，即用相似的引物與目標(biāo)產(chǎn)物共擴(kuò)增，而擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測通常在跑膠以后通過染料、放射活性或者探針進(jìn)行檢測。（3）大多數(shù)是終點檢測，即PCR到達(dá)平臺期后進(jìn)行檢測，而PCR經(jīng)過對數(shù)期擴(kuò)增到達(dá)平臺期時，檢測重現(xiàn)性極差。同一個模板在96孔PCR儀上做96次重復(fù)實驗，所得結(jié)果有很大差異（如下圖所示），因此無法直接從終點產(chǎn)物量推算出起始模板量；雖然加入內(nèi)標(biāo)后，可部分消除終產(chǎn)物定量所造成的不準(zhǔn)確性。但即使如此，傳統(tǒng)的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法，所以傳統(tǒng)定量PCR的缺點是：勞動強(qiáng)度大、定量不準(zhǔn)確、重復(fù)性差。
腺花香茶菜Isodon adenantha α-Tocopherol acetate 乙酸維生素E 58-95-7 C31H52O3 ≥95%

*Nicotincmidq98-9-020mg

千層紙素A;木蝴蝶素 Oroxylin A 480-11-5 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

標(biāo)準(zhǔn)試劑牛纖維蛋白原140607-200535供*效價測定用

白花前胡醇 Peucedanol 28095-18-3 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

大黃酸 Rhein (≥98%,HPLC) 478-43-3 20MG 標(biāo)準(zhǔn)品

楊梅樹皮羊肚菌 The bark of Myrica esculenta 3-O-沒食子酰粘酸 143202-36-2 C13H14O12 ≥98% 凱托米同 雜質(zhì)C(Y0000245

wo7ium Aescinate七葉皂苷20977-05-320mg/支

Desoximetasone去羥米松標(biāo)準(zhǔn)品382-67-2200mg

琥珀Ambrum Bane diacid 琥珀酸 110-15-6 C4H6O4 ≥98%

一年蓬Erigeron annuus Pyromeconic acid 焦袂康酸 496-63-9 C5H4O3 ≥98%

光甘草定GlcbridinHPLC≥98%;20mg/支

一葉萩減;葉底珠減 Securinine 5610-40-2 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

含量測定鹽酸氮桌斯汀100604-200701常溫，避光100mg

Prednisolone Acetate 醋酸*龍標(biāo)準(zhǔn)品52-21-1 200mg

Taq Plus DNA聚合酶  進(jìn)口分裝  大鼠白細(xì)胞三烯D4(rat LTD4)

4 x Tris×HCl/SDS，pH6.8  進(jìn)口分裝  大鼠酚(rat PYR)

吐溫80(藥用級)  進(jìn)口分裝  大鼠巨嗜細(xì)胞炎性蛋白 -2(rat MIP-2)

氯化銅二水(AR)  進(jìn)口分裝  兔血栓調(diào)節(jié)蛋白(rabbit TM)

達(dá)比加群  進(jìn)口分裝  小鼠血管內(nèi)皮生長因子受體-2(mouse VEGF R2)

來那替尼  進(jìn)口分裝  粒細(xì)胞集落刺激因子 (G-CSF)

山柰酚-3-O-蕓香糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)  進(jìn)口分裝  干擾素 -w(IFN-w)

*1.5水合物(標(biāo)準(zhǔn)品)  進(jìn)口分裝  白介素 -16(IL-16)

豬流感病毒通用型(SIV-U) 核酸檢測試劑盒圖片大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子B(VEGF-B)ELISAKit  進(jìn)口分裝  香葉木素-7-O-β-D-葡萄糖苷    A0475  20126-59-4    HPLC≥98%  20mg/支

大鼠白介素12(IL-12/P40)ELISAKit  進(jìn)口分裝  水仙苷; 異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷    A0476  604-80-8    HPLC≥98%  20mg/支

大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子C(VEGF-C)ELISAKit  進(jìn)口分裝  芍藥內(nèi)酯苷    A0477  39011-90-0    HPLC≥91%  20mg/支

大鼠白介素11(IL-11)ELISAKit  進(jìn)口分裝  素    A0478  491-54-3    HPLC≥98%  20mg/支