細胞凋亡途徑中各事件的發生是有時序性的,即各事件按先后順序依次發生,zui終導致凋亡小體的出現,細胞隨著發生凋亡。典型特征為:細胞膜PS(磷脂酰*)的外翻;線粒體膜電位的喪失;細胞核凝縮和斷裂。

一、PS(磷脂酰*)在細胞外膜上的檢測(Annexin V法)
在正常的活細胞中,磷脂酰*(phosphotidylserine,PS)位于細胞膜的內側,但在早期凋亡的細胞中,PS 從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面,暴露在細胞外環境中。Annexin-V(膜聯蛋白-V)是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴性磷脂結合蛋白,能與PS高親和力結合。用熒光素(FITC、Alexa Fluor488等)標記的 Annexin-V 作為探針,利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生。另外,dian化丙啶(propidine iodide, PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但在凋亡中晚期的細胞和死細胞,PI 能夠透過細胞膜而使細胞核紅染。因此將 Annexin-V 與 PI 匹配使用,就可以將凋亡早晚期的細胞以及死細胞區分開來。
二、TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling)
細胞凋亡晚期, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產生大量的粘性3-OH末端,可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)的作用下,將熒光素/酶標記的dUTP結合到DNA的3-末端,從而可進行凋亡細胞的檢測,這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法(terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂,因而沒有3-OH形成,很少能夠被染色。TUNEL實際上是分子生物學與形態學相結合的研究方法,對完整的單個凋亡細胞核或凋亡小體進行原位染色,能準確地反應細胞凋亡典型的生物化學和形態特征,可用于石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養的細胞和從組織中分離的細胞的細胞形態測定,并可檢測出J少量的凋亡細胞,因而在細胞凋亡的研究中被廣泛采用。
三、相關研究工具
貨號 | 名稱 | 樣本類型 | 檢測儀器 |
KTA0001 | Annexin V-AbFluor™ 408細胞凋亡檢測試劑盒 | 活細胞 | 倒置熒光顯微鏡 正置熒光顯微鏡(細胞涂片) 激光共聚焦顯微鏡 細胞流式儀 |
KTA0002 | Annexin V-AbFluor™ 488細胞凋亡檢測試劑盒 | 活細胞 |
KTA0003 | Annexin V-AbFluor™ 555細胞凋亡檢測試劑盒 | 活細胞 |
KTA0004 | Annexin V-AbFluor™ 647細胞凋亡檢測試劑盒 | 活細胞 |
KTA2010 | TUNEL法細胞凋亡檢測試劑盒 (綠色熒光) | 活細胞 固定細胞 組織 | 正置熒光顯微鏡 激光共聚焦 |
KTA2011 | TUNEL法細胞凋亡檢測試劑盒 (橙色熒光) |
BMD00062 | Hoechst 33342 | 細胞 組織 | 熒光顯微鏡 細胞流式儀 激光共聚焦 |
BMD00063 | DAPI |
來源:Abbkine
Annexin V/PI細胞凋亡檢測試劑盒現貨供應
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