【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 雜交瘤細胞株;5H3培養
形態特性 淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 未定
產品名稱 | 雜交瘤細胞株;5H3培養 |
貨期 | 3-5天 |
發貨地 | 上海 |
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
小鼠細胞周期素D3(Cyclin-D3)免疫試劑盒 Mouse Cyclin-D3 ELISA Kit
小鼠細胞周期素D2(Cyclin-D2)免疫試劑盒 Mouse Cyclin-D2 ELISA Kit
小鼠細胞角蛋白18-M30(CK 18-M30)免疫試劑盒 Mouse Cytokeratin 18-M30,CK 18-M30 ELISA Kit
小鼠細胞間粘附分3(ICAM-3/CD50)免疫試劑盒 Mouse intercellular adhesion molecule 3,ICAM-3 ELISA Kit
小鼠細胞間粘附分2(ICAM-2/CD102)免疫試劑盒 Mouse intercellular adhesion molecule 2,ICAM-2 ELISA Kit
小鼠細胞間粘附分1(ICAM-1/CD54)免疫試劑盒 Mouse intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1 ELISA KIT
小鼠細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4(CTLA-4/CD152)免疫試劑盒 Mouse cytotoxic T lymphocyte associated antigen 4,CTLA-4 ELISA Kit
小鼠硒蛋白M(SELM)免疫試劑盒 Mouse selenoprotein M,SELM ELISA kit
小鼠戊型肝炎病毒(HEV)抗體(IgG)免疫試劑盒 Mouse Hepatitis E virus (HEV) antibody(IgG)ELISA Kit
小鼠戊糖素(Pentosidine)免疫試劑盒 Mouse Pentosidine ELISA Kit
小鼠胃泌酸調節素免疫試劑盒 Mouse oxyntomodulin ELISA Kit焦磷酸鉀 shēng huà shì jì 容量: 25克
焦磷酸鈣 shēng huà shì jì 容量: RT 1克
膠原酶 shēng huà shì jì 容量: 25克
膠原蛋白 shēng huà shì jì 容量: RT 25克
膠回收kit shēng huà shì jì 容量: RT 500克
堿性蛋白酶 shēng huà shì jì 容量: 2~8℃,避光 1克
堿性蛋白胨水 shēng huà shì jì 容量: 100毫升
堿性膽鹽瓊脂 shēng huà shì jì 容量: 25克
堿性L-G培養基基礎 shēng huà shì jì 容量: 保存:-20℃ 10克
堿式乙酸鉛 shēng huà shì jì 容量: 25克
堿式乙酸鋁 shēng huà shì jì 容量: 100克
堿式碳酸鋅 shēng huà shì jì 容量: 50毫升
堿式碳酸鎳 shēng huà shì jì 容量: RT 25克