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小鼠胚胎細胞;RMD9培養

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所  在  地上海

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更新時間:2017-02-08 09:18:08瀏覽次數:219次

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產品簡介

小鼠胚胎細胞;RMD9培養細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

產品名稱小鼠胚胎細胞;RMD9培養
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  小鼠胚胎細胞;RMD9培養
形態特性   上皮樣
生長特性  貼壁生長
特征特性   該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。 
培養條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況  C5
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權限  未定

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療
番瀉 Cassia angutifolia Vahl    Sennoside B    番瀉苷B    128-57-4    C42H38O20    ≥98%
番瀉 Cassia angutifolia Vahl    Sennoside C    番瀉苷C    37271-16-2    C42H40O19    ≥98%
番瀉 Cassia angutifolia Vahl    Sennoside D    番瀉苷D    37271-17-3    C42H40O19    ≥98%
狼牙刺Sophora viciifolia    Sepinol    (2R,3R)-2-(3,5-二羥基-4-甲氧基苯基)-2,3-二氫-3,7-二羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮    72061-63-3    C16H14O7    ≥95%
水杉Metasequoia glyptostroboides    Sequirin C    none    18194-29-1    C17H18O5    ≥95%
水杉Metasequoia glyptostroboides    Sequosempervirin B    北美紅杉素B    864719-17-5    C18H20O5    ≥95%
水杉Metasequoia glyptostroboides    Sequosempervirin D    北美紅杉素D    864719-19-7    C21H24O5    ≥95%
云南蘿芙木Rauvolfia yunnanensis    Serpentine    蛇紋石素    18786-24-8    C21H21N2O3    ≥99%
長春花Catharanthus roseus    Serpentinic acid    none    605-14-1    C20H19N2O3    ≥97%小鼠神經特異性烯醇化酶(NSE)ELISA Kit    ,英文名:    Mouse Neuron-specific enolase,NSE ELISA Kit    ,規格:    48T/96T
小鼠神經肽Y(NPY)ELISA Kit    ,英文名:    Mouse neuropeptide Y,NPY ELISA kit    ,規格:    48T/96T
小鼠神經絲蛋白L(NF-L)ELISA Kit    ,英文名:    Mouse Neurofilament protein L,NF-L ELISA kit    ,規格:    48T/96T
小鼠神經生長因子前體(proNGF)ELISA Kit    ,英文名:    Mouse Pro-Nerve growth factor,proNGF ELISA kit    ,規格:    48T/96T
小鼠神經調節蛋白4(NRG4)ELISA Kit    ,英文名:    Mouse neuregulin-4,NRG4 ELISA kit    ,規格:    48T/96T
小鼠神經調節蛋白3(NRG3)ELISA Kit    ,英文名:    Mouse neuregulin-3,NRG3 ELISA kit    ,規格:    48T/96T
小鼠神經調節蛋白2(NRG2)ELISA Kit    ,英文名:    Mouse neuregulin-2,NRG2 ELISA kit    ,規格:    48T/96T
小鼠神經調節蛋白1(NRG1)ELISA Kit    ,英文名:    Mouse neuregulin-1,NRG1 ELISA kit    ,規格:    48T/96T

 

 


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