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人成骨肉瘤細胞;well2復蘇

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更新時間:2017-01-23 11:50:39瀏覽次數:454次

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產品簡介

人成骨肉瘤細胞;well2復蘇細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

產品名稱生長特性發貨地貨期
人成骨肉瘤細胞;well2復蘇貼壁生長上海3-5天

細胞名稱  人成骨肉瘤細胞;well2復蘇
形態特性   上皮細胞樣
生長特性  貼壁生長
特征特性   該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。 
培養條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況  C3
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權限  未定

來源可靠(源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等),活力>95%,貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細胞、新鮮原代細胞、原代細胞的分子學實驗等提供全程服務。我司擁有專業的實驗室,可無菌操作并提供相關科研項目解決方案以及實驗服務。
細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優質胎牛血清,10%。
2、培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量*,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量*,使*的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去*,加入新鮮培養基,晃動細胞瓶,終止*作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液。控制吹打的力度,避免產生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養,隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內,1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養。
茜素-β-半乳糖苷瓊脂    250    用于食品、飲料和飲用水中大腸菌群快速檢測和計數(GB/T)            
Tergitol-7 瓊脂    250    用于大腸菌群的鑒定(NMKL)            
TTC 溶液(0.125%)    2ml*10    添加于HB0127中            
標準I號營養瓊脂    250    標準細菌計數、含糖(MERCK方法)            
標準II號營養瓊脂    250    細菌計數、不含糖,可作血瓊脂基礎和傳代用(MERCK方法)            
A1 培養基    250    用于檢測水中的大腸菌群       
哥倫比亞CNA瓊脂基礎        用于分離革蘭氏陽性球菌(Acumedia方法)            
m-FC 瓊脂        用于大腸菌群的濾膜法檢測(MERCK方法)            
m-FC肉湯        用于大腸菌群的濾膜法檢測(MERCK方法)            
濾膜腸球菌瓊脂        用于腸球菌的濾膜法檢測(MERCK方法)            
酵母粉瓊脂        用于水中細菌總數的檢測(ISO標準)            C20orf4    20號染色體開放閱讀框4抗體
phospho-delta 1 Catenin (Thr310)    磷酸化δ連環蛋白抗體
phospho-delta 1 Catenin (Thr916)    磷酸化δ連環蛋白抗體
phospho-delta 1 Catenin (Tyr228)    磷酸化δ連環蛋白抗體
phospho-delta 1 Catenin (Tyr291)    磷酸化δ連環蛋白抗體
phospho-delta 1 Catenin (Tyr96)    磷酸化δ連環蛋白抗體
C22orf43     22號染色體開放閱讀框43抗體
C2CD3    C2CD3蛋白抗體
Caspase 14    半胱胺酸蛋白酶蛋白14抗體
C3orf55    3號染色體開放閱讀框55抗體
C3orf65    3號染色體開放閱讀框65抗體
C3orf14     3號染色體開放閱讀框14抗體
C3orf20    3號染色體開放閱讀框20抗體
C3orf23     3號染色體開放閱讀框23抗體
C3ORF31     3號染色體開放閱讀框31抗體

 

 


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