【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人類淋巴母細胞瘤細胞;HLCL 9B10使用說明書
形態特性 淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 未定
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
c-Abl 非受體*激酶c-Abl抗體
CCDC152 卷曲螺旋結構域蛋白152抗體
CHPT1 甘油二酯*磷酸轉移酶抗體
Chromogranin B 嗜鉻粒素B抗體
Cullin 5 血管加壓素激活鈣啟動受體蛋白1抗體
Cyp2-j3 細胞色素P450Ⅱj3抗體
CLCA4 鈣激活氯離子通道4抗體
CDK6 周期素依賴激酶6抗體
CDK7 周期素依賴激酶7抗體
CDK8 周期素依賴激酶8抗體
CDKN1C 周期蛋白依賴激酶抑制因子1C抗體
Chondrocalcin Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體
c-fos c-fos抗體
Chromogranin A 嗜鉻粒素A抗體
CGRP CGRP降鈣素基因相關肽抗體 12154 酵母氮源基礎(YNB) 250g/瓶 用于通過碳源的利用對酵母菌進 行分類
11006 含鐵牛奶培養基 250g/瓶 用于產氣莢膜梭菌暴烈發酵試驗
11008 梭菌* 250g/瓶 用于梭菌的增菌培養
11014 產芽孢肉湯 250g/瓶 用于產氣莢膜梭菌的芽孢試驗
11015 多價蛋白胨-酵母膏(PY)培養基 250g/瓶 用于產氣莢膜梭菌培養
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11021 厭氧卵黃瓊脂基礎 250g/瓶 用于肉毒梭菌增菌分離,每 100ml培養基中添加 3 支 21001
11022 明膠磷酸鹽緩沖液 250g/瓶 用于肉毒梭菌和肉毒毒素檢樣的 制備
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11024 TBB 培養基 250g/瓶 用于乳酪產品中梭菌的計數
11027 強化梭菌鑒別瓊脂(DRCA) 250g/瓶 用于食品和其它物質中梭菌的計 數和培養