【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人舌鱗癌細胞;Tca-8113 [Tca8113]培養
形態特性 上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 Tca-8113源于原位舌鱗癌的活檢組織;組織塊培養法培養7天開始生長,*傳代71天,已傳160代;傳代時間為38小時;傳代第3天有絲分裂指數為61%,移植效率為86%,軟瓊脂克隆生成率為53%~57.7%。免疫抑制的C57BL/6和ICR幼小鼠皮下移植成功;電鏡和組化特征與鱗癌相符。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR STR鑒定
同工酶
染色體
使用權限 A類
人舌鱗癌細胞;Tca-8113 [Tca8113]培養復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
人舌鱗癌細胞;Tca-8113 [Tca8113]培養操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
beta Defensin 1 防御素β1/Defensin β1抗體
BAFFR B細胞活化因子受體抗體
BAFF TNF家族B細胞激活因子抗體
Batroxobin 蛇毒巴曲酶抗體
Brn-2 大腦蛋白2抗體
CD274 程序死亡配體1抗體
B7H4 B7-H4抗體
BACE1 β分泌酶抗體
Bad 相關死亡促進因子Bad抗體
Bax Bax
B7-DC 程序死亡配體2抗體
BSEP 膽汁酸鹽輸出泵/ATP結合盒轉運蛋白11抗體
Beta-2-MG(B2E5) β2微球蛋白抗體(單抗)
Biglycan 骨/軟骨蛋白多糖1抗體
CAP 染色體相關蛋白CAP抗體麥康凱肉湯 (CM0005) Oxoid
MRVP 培養基 (Clarks and Lubs 培養基) (CM0043) Oxoid
MAmies 轉運培養基 (CM0425) Oxoid
S.I.M. 培養基 (CM0435) Oxoid
Schaedler Anaerobic Agar Schaedler 厭氧瓊脂 Oxoid 500G
標準平板計數瓊脂 APHA (CM0463) Oxoid
XLD 培養基 (CM0469) Oxoid
Iso-Sensitest 瓊脂 (CM0471) Oxoid
Iso-Sensitest 肉湯 (CM0473) Oxoid
遠藤氏瓊脂基礎 (CM0479) Oxoid
紫紅膽汁葡萄糖瓊脂 (CM0485) Oxoid
人舌鱗癌細胞;Tca-8113 [Tca8113]培養Tinsdale 瓊脂基礎 (CM0487) Oxoid
Schaedler Anaerobic Broth /Schaedler 厭氧肉湯 Oxoid 500G
W.L.營養肉湯 (CM0501) Oxoid
紫色麥康凱肉湯 (麥康凱肉湯 (US 配方)) (CM0005a) Oxoid
紫色麥康凱肉湯 (US 配方) (CM0006a) Oxoid