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*；HEL培養(yǎng)

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更新時間：2017-01-20 09:39:39瀏覽次數(shù)：203次

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產(chǎn)品簡介

*；HEL培養(yǎng)一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

產(chǎn)品名稱	*；HEL培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細胞名稱 *；HEL培養(yǎng)
形態(tài)特性   成纖維細胞樣
生長特性貼壁生長
特征特性   HEL是一株*系，具有典型的成纖維細胞形態(tài)，染色體2n＝46?？捎糜谧鞫喾N病毒的宿主，抗衰老藥物試驗等。
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C19
凍存條件   基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測陰性
STR   STR鑒定
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

*；HEL使用說明書復蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
phospho-GIRK1 (Ser185)   英文名稱：   磷酸化G蛋白激活內(nèi)向鉀通道1抗體   ?0.1ml
GIT2   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白2抗體   ?0.2ml
GJA10   英文名稱：   間隙連接蛋白10抗體   ?0.1ml
GJA3   英文名稱：   間隙連結(jié)蛋白46/白內(nèi)障相關蛋白抗體   ?0.2ml
GJA8   英文名稱：   間隙連結(jié)蛋白50/白內(nèi)障相關蛋白抗體   ?0.2ml
GJC1   英文名稱：   間隙連結(jié)蛋白31.9抗體   ?0.2ml
GK2   英文名稱：   甘油激酶2抗體   ?0.2ml
GLB1   英文名稱：   β-半乳糖苷酶1/β-Gal/彈蛋白受體1抗體   ?0.2ml
GLDC   英文名稱：   *脫羧酶P蛋白抗體   ?0.2ml
GLE1   英文名稱：   核孔蛋白GLE1抗體   ?0.2ml
GLEPP1   英文名稱：   腎小球上皮蛋白1抗體   ?0.2mlC3b(Human Complement fragment 3b) ELISA Kit 人補體片斷3b   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
C4b(Human Complement fragment 4b) ELISA Kit 人補體片斷4b   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
C4d(Human Complement fragment 4d) ELISA Kit 人補體片斷4d   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
C5b(Human Complement fragment 5b) ELISA Kit 人補體片斷5b   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
IgH(Human immunoglobulin heavy chain) ELISA Kit *重鏈   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
IgHV(Human immunoglobulin heavy chain variable region) ELISA Kit *重鏈可變區(qū)   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
poly-IgR(polyimmunoglobulinreceptor) ELISA Kit 人多免疫球蛋白受體   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Hb-AGE(Human hemoglobin-advanced glycosylation end products) ELISA Kit 人血紅蛋白晚期糖基化終末產(chǎn)物   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
mIgA(Human membrane IgA) ELISA Kit 人表面膜免疫球蛋白A   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T