【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人臍靜脈細胞融合細胞;EA.hy926使用說明書
形態特性 梭形
生長特性 貼壁生長
特征特性 在PEG脅迫下,將原代培養的人臍靜脈細胞與抗硫*的A549克隆株融合,構建了人臍靜脈細胞株, EA.hy926。 融合子在HAT培養基上生長并以八因子相關抗原篩選。 EA.hy926已經過100次以上的群體倍增(PDLs)。 電鏡照片顯示Weibel-Palade小體的細胞質分布以及組織特異性的細胞器,分化的內皮細胞特性如血管生成,體內平衡/血栓形成,血壓及炎癥反應。
培養條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:2傳代;2-3天傳代一次。
傳代情況
凍存條件 基礎培養基+8%DMSO+27%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:10,11,12;D13S317:11;D16S539:11,12;D18S51:13,15,17;D19S433:13,14;D21S11:28,29,32;D2S1338:22,24;D3S1358:15,16;D5S818:11;D7S820:8,9,10;D8S1179:13;FGA:22,23;TH01:6,8,9.3;TPOX:8,9;vWA:14,17;
同工酶
染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
SO(Human anti-streptolysin O) ELISA Kit 人抗鏈球菌溶血素O/抗O Multi-class antibodies 規格: 48T
ACA(Human adrenal cortex antibody) ELISA Kit 人腎上腺皮質抗體 Multi-class antibodies 規格: 48T
GBM(Human glomerular basement membrane antibogy) ELISA Kit 人抗腎小球基底膜抗體 Multi-class antibodies 規格: 48T
BMG/ Beta2-MG(Human Beta2-microglobulin) ELISA Kit 人β2微球蛋白 Multi-class antibodies 規格: 48T
ANX- V (Human Annexin V ) ELISA Kit 人膜聯蛋白Ⅴ Multi-class antibodies 規格: 48T
TBM(Human tubular basement membrane antibogy) ELISA Kit 人抗腎小管基底膜抗體 Multi-class antibodies 規格: 48T
AP13(Human apelin 13) ELISA Kit 人apelin 13 Multi-class antibodies 規格: 48T
AP36(Human Apelin 36) ELISA Kit 人Apelin 36 Multi-class antibodies 規格: 48T
Tn-T(Human Troponin T) ELISA Kit 人肌鈣蛋白T Multi-class antibodies 規格: 48T
ES-Ab(Human anti-Endostatin antibody) ELISA Kit 人血管內皮抑素抗體 Multi-class antibodies 規格: 48TRIK1 英文名稱: *受體紅藻氨酸離子1抗體 ?0.2ml
GRASP 英文名稱: 一般受體磷酸肌醇相關支架蛋白1抗體 ?0.2ml
GRIK5 英文名稱: *受體紅藻氨酸離子5抗體 ?0.1ml
GODZ 英文名稱: 棕櫚酰轉移酶GODZ抗體 ?0.2ml
GPSM1 英文名稱: G蛋白信號調節蛋白1抗體 ?0.2ml
GABA A Receptor beta 2 + 3 英文名稱: G氨基丁酸受體β2+3/GABAA Rβ2+GABAA Rβ2抗體 ?0.2ml
G protein alpha 英文名稱: G蛋白α抗體 ?0.2ml
G protein beta subunit like 英文名稱: G蛋白β樣蛋白抗體 ?0.2ml
GTF2B 英文名稱: 通用轉錄因子GTF2B抗體 ?0.2ml
phospho-gp130 (Ser782) 英文名稱: 磷酸化gp130抗體 ?0.1ml
GLTPD2 英文名稱: 糖脂轉移蛋白結構域2抗體 ?0.2ml
GOLGA6L4 英文名稱: 高爾基體膜相關蛋白6樣蛋白4抗體 ?0.2ml
GIPC-2 英文名稱: 胞漿區相關蛋白GIPC2抗體 ?0.2ml