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人胚肺二倍體細(xì)胞；KMB-17使用說(shuō)明書(shū)

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

人胚肺二倍體細(xì)胞；KMB-17使用說(shuō)明書(shū)，細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

產(chǎn)品名稱(chēng)	人胚肺二倍體細(xì)胞；KMB-17使用說(shuō)明書(shū)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱(chēng) 人胚肺二倍體細(xì)胞；KMB-17使用說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性   成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)
特征特性   來(lái)自于4周齡女孩胚胎，1975年中國(guó)醫(yī)學(xué)*昆明醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所建立；可作為轉(zhuǎn)染宿主，用于肺損傷或分化的研究。
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  新生牛血清，10%；水解乳蛋白，10%
傳代方法   1：2-1：4
傳代情況 P10
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)液+20%牛血清+10%DMSO
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR   Amelogenin:X； D7S820:9,11；CSF1PO:12；D13S317:9,12；D16S539:11,13；D18S51:14,17；D21S11:29,30；D3S1358:16；D5S818:13；D8S1179:11,13；FGA:20,27；PentaD:9,13；PentaE:12,15；TH01:7；TPOX:10,11；vWA:14,18
同工酶人B,NP,G8PG,MD,AST
染色體
使用權(quán)限 A類(lèi)

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀(guān)察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀(guān)察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀(guān)察。
eNOS(Human Endothelial nitric oxide synthase) ELISA Kit 人內(nèi)皮型一氧化氮合成酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
HO-1(Human heme oxygenase 1) ELISA Kit 人血紅素氧合酶1   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
iNOS(Human inducible nitric oxide synthase) ELISA KIT 人誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PL-A2(Human Phospholipidase A2) ELISA Kit 人磷脂酶A2   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
NOS(Human nitric oxide synthase) ELISA Kit 人一氧化氮合成酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
TE(Human omerase) ELISA Kit 人端粒酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
MMP-5(Human matrix metalloproteinase 5) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶5   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
MMP-4(Human matrix metalloproteinase 4) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶4   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
MMP-9/Gelatinase B(Human matrix metalloproteinase 9/Gelatinase B) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
NSE(Human Neuron-specific enolase) ELISA Kit 人神經(jīng)特異烯醇化酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
CK-MB(Human Creatine Kinase MB isoenzyme) ELISA Kit 人肌酸激酶同工酶MB   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48TGPR124   英文名稱(chēng)：   G蛋白偶聯(lián)受體124抗體（腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)記物）   ?0.1ml
Galectin 1   英文名稱(chēng)：   半乳糖凝集素1抗體   ?0.1ml
GANAB   英文名稱(chēng)：   α葡萄糖苷酶2抗體   ?0.1ml
Galectin 7   英文名稱(chēng)：   半乳糖凝集素7抗體   ?0.2ml
GCDFP15   英文名稱(chēng)：   特異囊腫病液體蛋白15抗體   ?0.2ml
GCET1   英文名稱(chēng)：   B淋巴細(xì)胞生發(fā)中心相關(guān)蛋白抗體   ?0.2ml
GASC1   英文名稱(chēng)：   鱗狀細(xì)胞癌增強(qiáng)蛋白1抗體   ?0.1ml
G alpha gust   英文名稱(chēng)：   Gα gust抗體   ?0.2ml
GLS1   英文名稱(chēng)：   *酶抗體   ?0.2ml
GCMA   英文名稱(chēng)：   絨毛膜特異轉(zhuǎn)錄因子GCMa抗體   ?0.1ml
GBP5   英文名稱(chēng)：   G蛋白結(jié)合蛋白5抗體   ?0.2ml
Cancer/testis antigen family 4 member 7   英文名稱(chēng)：   腫瘤/抗原家族4亞型7抗體   ?0.2ml
GFR alpha 3   英文名稱(chēng)：   GDNF家族受體α3抗體 GFR α3   ?0.2ml