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人胚肺成纖維細(xì)胞；HFL1培養(yǎng)

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

人胚肺成纖維細(xì)胞；HFL1培養(yǎng)，細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

產(chǎn)品名稱	人胚肺成纖維細(xì)胞；HFL1培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 人胚肺成纖維細(xì)胞；HFL1培養(yǎng)
形態(tài)特性   成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)
特征特性   該細(xì)胞為穩(wěn)定二倍體細(xì)胞。
培養(yǎng)條件   F12K  10%FBS
傳代方法   1:4-1:6，每周換液2-3次
傳代情況 P16
凍存條件   90%FBS+10%DMSO
支原體檢測(cè)
STR   Amelogenin:X；CSF1PO:10；D13S317:8；D16S539:9,11；D18S51:15；D21S11:31.2,32.2；D3S1358:15,17；D5S818:11,12；D7S820:11；D8S1179:12,14；FGA:21,24；PentaD:9,14；PentaE:21；TH01:6,9；TPOX:8；vWA:16
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
L-LDH(Human L-Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit 人L-乳酸脫氫酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
ASM(Human acid sphingomyelinase) ELISA Kit 人酸神經(jīng)鞘磷脂酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
ALOX-5(Human arachidonate 5-lipoxygenase) ELISA Kit 人花生四烯酸5脂加氧酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
5-LO/LOX(Human 5-lipoxygenase) ELISA Kit 人5脂加氧酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
AC-1(Human adenylyl cyclase 1) ELISA Kit 人腺苷酸環(huán)化酶1   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
sAC(Human Soluble Adenylate Cyclase) ELISA Kit 人可溶腺苷酸環(huán)化酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
ODC(Human Ornithine decarboxylase) ELISA Kit 人*脫羧酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PTK/CD115(Human protein tyrosine kinase) ELISA Kit 人蛋白*激酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PTP/PTPase/CD148(Human protein tyrosine phosphatase) ELISA Kit 人蛋白*磷酸酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
TACE(Human TNF Alpha converting enzyme) ELISA Kit 人腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PMN Elastase(Human Polymorphonuclear Elastase) ELISA Kit 人多形核白細(xì)胞彈蛋白酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
uPA/PLAU(Human urokinase-type plasminogen activator) ELISA Kit 人*型纖溶酶原激活物   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
KLK 8(Human urokinase-type plasminogen activator) ELISA Kit 人*8   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48TGPR110   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體110抗體   ?0.2ml
GPR12   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體12抗體   ?0.2ml
GPR124   英文名稱：   腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)志物/G蛋白偶聯(lián)受體124抗體   ?0.2ml
GPR58   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體58抗體   ?0.2ml
GPR128   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體128抗體   ?0.2ml
GPR128   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體128抗體   ?0.2ml
GPR146   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體146抗體   ?0.2ml
GPR146   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體146抗體   ?0.2ml
GPR17   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體17抗體   ?0.2ml
GPR19   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體19抗體   ?0.2ml
GPR20   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體20抗體   ?0.2ml
GPR21   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體21抗體   ?0.2ml
GPR22   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體22抗體   ?0.2ml
GPR25   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體25抗體   ?0.2ml
GPR26   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體26抗體   ?0.2ml