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技術文章

elisa檢測試劑盒操作步驟

閱讀:188發布時間:2017-5-19

elisa檢測試劑盒原理
利用雙抗體夾心技術,將抗CEA的單克隆抗體包被于聚苯乙烯塑料珠上,制成固相抗體珠,用此珠去吸附樣品中的CEA,充分洗滌后再依次與酶標記CEA抗體與底物反應,以成色后的吸光度值從劑量反應曲線查得樣品中的cEA含量。
試劑
    1.CEA標準液 用純化CEA配制為濃度分別為0、1.5、3.0、10.0、20.ong/ml系列標準液。
    2.CEA抽提液0.Zmol/L醋酸鈉緩沖液(pHS.0)。
    3.基質應用液取鄰苯二胺80mg溶于pHS.O磷酸一拘攤酸緩沖液50ml中,56℃水浴中助溶。*溶后加人新鮮的30%HZ認20川,混勻。此基質液呈無色透明液體,若顯黃色不能使用。將此底物液貯于棕色瓶中,30而n內用完。
    4.辣根過氧化物酶(HRP)標記的抗CEA抗體。
    5.洗滌液0.osmol/LP贅(pH7.40)一0.1%Tween一20.
    6.抗CEA單克隆抗體包被的圓珠.
    7.待檢血樣血清(漿)。
操作步驟
    1.待檢抗原的制備取待檢血清或血漿0.sml,加0.Zmol/L醋酸鈉緩沖液
(pHS.o)1.oml,混勻后于70℃水浴內15min。以3 000r/而n離心10而n。取上清液作
為3倍稀釋的待檢抗原。陽性對照品必須同步處理。
    2.在20孔反應板上每孔中加人上述(*步操作)待檢抗原0.Zml。同時加人
CEA標準抗原及陽性對照抗原。每份樣品均作平行兩孔。
    3.用鑷子夾起CEA固相抗體珠,甩掉附著的液體后投人孔內。反應板上班蓋一張
干凈紙,將板漂浮于37℃水浴中反應Zh。注意勿蓋水箱蓋,反應完成后可連續操作或
置4℃過夜。
    4.用PBS一Tween一20洗滌液洗滌3次。每次加入洗滌液后放置3而n再抽凈(負壓抽吸)洗液。zui后一次洗液放人后靜置至準備加酶標記抗CEA之前時再抽凈。
    5.二抗液制備 取每支凍干的酶標記抗CEA抗體用蒸餾水1.Oml溶解,因凍干時加有明膠保護劑,溶解時須放置37℃水浴中lmin。待充分溶解后再按要求稀釋至zui適工作濃度。
    6.將孔中洗滌液抽凈,每孔加人酶標記抗CEA工作液0.Zml,將反應板用干凈紙覆蓋后再漂浮于37℃水浴中反應2h,勿蓋水箱蓋。
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 TGF-β1     豚鼠轉化生長因子β1     規格:    48T/96T
 MHC/GPLA     豚鼠主要組織相容性復合體     規格:    48T/96T
 TNF-α     豚鼠腫瘤壞死因子α     規格:    48T/96T
 CH50     豚鼠血清總補體     規格:    48T/96T
 NO     豚鼠血清一氧化氮     規格:    48T/96T
 PAP     豚鼠纖溶酶抗纖溶酶復合物     規格:    48T/96T
 AGEs     豚鼠晚期糖基化終末產物     規格:    48T/96T
 GH     豚鼠生長激素     規格:    48T/96T
 eNOS     豚鼠內皮型一氧化氮合成酶     規格:    48T/96T
 ET-1     豚鼠內皮素1     規格:    48T/96T
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 IgE     豚鼠免疫球蛋白E     規格:    48T/96T
 IgA     豚鼠免疫球蛋白A     規格:    48T/96T
 OVA sIgG     豚鼠卵清蛋白特異性IgG     規格:    48T/96T
 OVA sIgE     豚鼠卵清蛋白特異性IgE     規格:    48T/96T
 CGRP     豚鼠降鈣素基因相關肽     規格:    48T/96T
 TIMP-1     豚鼠基質金屬蛋白酶抑制因子1     規格:    48T/96T
 MMP-9     豚鼠基質金屬蛋白酶9     規格:    48T/96T
 LPO     豚鼠過氧化脂質/乳過氧化物酶     規格:    48T/96T
 Lebtospira     豚鼠鉤端螺旋體IgG     規格:    48T/96T
 HGF     豚鼠肝細胞生長因子     規格:    48T/96T
 TE     豚鼠端粒酶     規格:    48T/96T
 MCP-4/CCL13     豚鼠單核細胞趨化蛋白4     規格:    48T/96T
 FSH     豚鼠促卵泡素     規格:    48T/96T
 SOD     豚鼠超氧化物歧化酶     規格:    48T/96T
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 EGF     豚鼠表皮生長因子     規格:    48T/96T
 LTD4     豚鼠白三烯D4     規格:    48T/96T
 LTB4     豚鼠白三烯B4     規格:    48T/96T
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 IL1Ra     豚鼠白介素1受體拮抗劑     規格:    48T/96T
 IL-12/P70     豚鼠白介素12     規格:    48T/96T
 IFN-γ     豚鼠γ干擾素     規格:    48T/96T
 TF     兔子組織因子     規格:    48T/96T
 t-PA     兔子組織型纖溶酶原激活劑     規格:    48T/96T
 TPA     兔子組織多肽抗原     規格:    48T/96T
 HIS     兔子組胺     規格:    48T/96T
 TGF-β1     兔子轉化生長因子β1     規格:    48T/96T
 MHCⅢ/RLAⅢ     兔子主要組織相容性復合體Ⅲ類     規格:    48T/96T
 TRAIL-R3     兔子腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體3     規格:    48T/96T
 TNF-α     兔子腫瘤壞死因子α     規格:    48T/96T
 NE     兔子中性粒細胞彈性蛋白酶     規格:    48T/96T
 ADP     兔子脂聯素     規格:    48T/96T
 Lp-PL-A2     兔子脂蛋白磷脂酶A2     規格:    48T/96T
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 IGF-1     兔子胰島素樣生長因子1     規格:    48T/96T
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