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技術文章

elisa試劑盒反應巢式PCR具體步驟

閱讀:414發布時間:2017-2-20

elisa酶聯免疫試劑盒巢式PCR是一種變異的聚合酶鏈反應(PCR),使用兩對(而非一對)PCR引物擴增完整的片段。實驗步驟
*步:目標的DNA模板藍色的*對引物結合。*對引物也可能結合到其他具有相似結合位點的片段上并擴增多種產物。但只有一種產物是目的片斷(圖中未顯示可能的多種產物)。
第二步:使用圖中紅色標記的第二套引物對*輪PCR擴增的產物進行第二輪PCR擴增。
由于第二套引物位于*輪PCR產物內部,而非目的片斷包含兩套引物結合位點的可能性極小,因此第二套引物不可能擴增非目的片斷。這種巢式PCR擴增確保第二輪PCR產物幾乎或者*沒有引物配對特異性不強造成的非特異性擴增的污染。
PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟
①模板DNA的變性:模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;
②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;
③引物的延伸:DNA模板--引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈重復循環變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。

elisa酶聯免疫試劑盒每完成一個循環需2~4分鐘,2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
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elisa酶聯免疫試劑盒

 

 


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