1、準備安瓿管 選用內徑5mm ，長10.5cm 的硬質玻璃試管，用10%的HCI浸泡8-10h 后用自來水沖洗多次，zui后用去離子水洗1-2次，烘干。將印有菌名和接種日期的標簽放入安瓿管內，有字的一面朝向管壁。管口加棉塞，121℃滅菌30min 。
2、制備脫脂牛奶 將脫脂奶粉配制成20%乳液，然后分裝，121℃滅菌30min，并做無菌試驗。
3、準備菌種 選用無污染的純菌種，培養時間，一般細菌24-48 h，酵母菌為3d ，放線菌與絲狀真菌7-10 d。ELISA試劑盒
4、制備菌液及分裝 吸取3m L 無菌牛奶直接加入斜面菌種管中，用接種環輕輕攪動菌落，再用手搖動試管，制成均勻的細胞或孢子懸液。用無菌的長滴管將菌液分裝于安瓿管底部，每管裝0.2 m L。
5、預凍 將安瓿管外的棉花剪去并將棉塞向里推至離管口約15 mm處（圖示），再通過乳膠管把安瓿管連接于總管的側管上，總管則通過厚壁橡皮管及三通短管與真空表及干燥瓶、真空泵相連接（圖示），并將所有安瓿管浸入裝有干冰和95%乙醇的預冷槽中，此時，槽內溫度可達-40—-50℃，只需冷凍1 h左右，即可使懸液凍成固體。
6、真空干燥 完成預凍后，升高總管使安瓿管僅底部與冰面接觸，此時溫度約-10℃，以保持安瓿管內的懸液仍呈固體狀態。開啟真空泵后，應在5-15 min內使真空度達66.7 Pa 以下，使被凍結的懸液開始升華，當真空度達到26.7-13.3 Pa時，凍結樣品逐漸被干燥成白色片狀，此時使安瓿管脫離冰浴，在室溫下（25-30℃），升溫可加速樣品中殘余水分的蒸發?？偢稍飼r間應根據安瓿管的數量，懸浮液裝置及保護劑性質來定，一般3-4 h。
7、封口 樣品干燥后繼續抽真空達1.33Pa時，在安瓿管棉塞的稍下部位用酒精噴燈火焰灼燒，拉成*并熔封（圖示），然后置4℃冰箱中保藏。ELISA試劑盒
8、恢復培養 用75%乙醇消毒安瓿管外壁后，在火焰上燒熱安瓿管上部，然后將無菌水滴在燒熱處，使管壁出現裂縫，放置片刻，讓空 氣從裂縫中緩慢進入管內后，將裂口端敲斷，這樣可以防止空氣因突然開口而進入管內使菌粉飛揚。將合適的培養液加入凍干樣品中，使干粉充分溶解，再用無菌水 的長頸滴管吸取菌液至合適培養基中，放置在zui合適溫度下培養。
冷凍干燥保藏法綜合利用了各種有利于菌種保藏的因素，如低溫、干燥和缺氧等，是目前zui有效的菌種保藏方法之一。保存時間可達10年以上
