西馬特羅檢測(cè)試劑盒 常言道“巧婦難為無米之炊”，但又云“有什么樣的米、做什么樣的飯”，也就是說，物品的先天屬性很重要，就像專業(yè)的事應(yīng)由專業(yè)的人來做一樣，否則就難以收獲滿意的效果！就臨床熒光PCR檢測(cè)質(zhì)量而言，“試劑盒的品質(zhì)、操作人員的專業(yè)素質(zhì)和儀器性能”，堪稱實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量建設(shè)的三支點(diǎn)。其中，試劑盒的品質(zhì)為重要。
一、
核酸提取方法對(duì)檢測(cè)質(zhì)量的影響
1、煮沸法：試劑盒一般采用20%聚乙二醇6000（PEG）進(jìn)行樣本核酸沉淀（或富集），去除上清液后，加入堿性裂解液煮沸，離心析出的上清液即作為PCR擴(kuò)增的模板。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單。但有以下不足：
（1）由于PEG沉淀物非常粘稠，裂解液較難*與之均勻混合，其混勻程度明顯影響核酸的釋放量，影響檢測(cè)的重復(fù)性；
（2）核酸純度低，干擾蛋白多，是試劑盒穩(wěn)定性和敏感性差的主要原因；
（3）高溫煮沸的核酸釋放方式，大大增加實(shí)驗(yàn)室氣溶膠污染的機(jī)會(huì)；
（4）核酸廢液難以封閉收集，防污染工作難度大，嚴(yán)重影響低拷貝樣本的準(zhǔn)確定量。由于以上不足，目前試劑盒已少有使用。
2、微量核酸釋放劑：核酸釋放劑主要由堿性液體組成，與微量血清或血漿樣本混勻?qū)崿F(xiàn)核酸的簡(jiǎn)單裂解，PCR擴(kuò)增反應(yīng)液直接加入混合液中擴(kuò)增。優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單。但有以下不足：
elisa檢測(cè)試劑盒 （1）穩(wěn)定性差：原因之一是，核酸釋放劑與擴(kuò)增試劑為一對(duì)中合體，核酸釋放劑加入量的準(zhǔn)確度直接影響擴(kuò)增反應(yīng)液的pH值或改變擴(kuò)增試劑的組分；其次，微量操作是個(gè)技術(shù)活！操作的要求在普通實(shí)驗(yàn)人員較難達(dá)到！這是直接被忽視的問題。如果把實(shí)驗(yàn)室工作人員組織起來進(jìn)行微量操作考核，結(jié)果你就會(huì)發(fā)現(xiàn)，能夠勝任的操作人員并不多！正因?yàn)椴僮?ldquo;太簡(jiǎn)單”、所以很容易“被自信”，出現(xiàn)問題后也很難從自身去尋找原因，試劑背黑鍋是大概率事件！檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)網(wǎng)
（2）敏感性低：除了樣本加入量少之外，樣本中的干擾物質(zhì)也是導(dǎo)致敏感性不足和結(jié)果不穩(wěn)定的重要因素。此外，如果試劑人員沒有采取核酸裂解液和擴(kuò)增試劑的對(duì)抗干擾措施，其檢測(cè)質(zhì)量難免會(huì)讓用戶失望。
（3）實(shí)驗(yàn)室污染：這種簡(jiǎn)單的操作步驟并沒有避免實(shí)驗(yàn)室的污染，也是好多人無法理解的，但吹吸的操作不但攜帶出少量混合物，更重要的是Tip頭有吸附核酸的特性，因此難免發(fā)生實(shí)驗(yàn)室的污染和核酸丟失。
3、吸附柱法：目前主要采用胍鹽為介質(zhì)的核酸裂解和乙醇為介質(zhì)的核酸漂洗，通過這種方法制備的核酸純度較高，但核酸丟失量大，而且丟棄的殘液和吸附柱存有大量核酸，為了消除乙醇對(duì)PCR擴(kuò)增的影響，吸附柱的晾干過程不但費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而且增加氣溶膠釋放的機(jī)會(huì)。
4、磁珠法：其原理與“吸附柱法”相同，只不過吸附核酸的載體不是纖維素膜，而是各種大小或修飾的磁珠，磁珠的性能差異是影響試劑盒質(zhì)量的重要因素，如磁珠大小、懸浮性能、表面修飾成分及磁力大小都會(huì)影響磁珠吸附核酸的能力。
二、
擴(kuò)增試劑品質(zhì)與檢測(cè)質(zhì)量
影響試劑盒品質(zhì)的環(huán)節(jié)是多方面的，除了試劑要充分發(fā)揮創(chuàng)造智慧，出技術(shù)含量高而操作要求低的產(chǎn)品外，實(shí)驗(yàn)人員也應(yīng)努力提高自己的專業(yè)水平和操作技能，充分了解試劑盒的性能，查找實(shí)驗(yàn)失敗的真正原因，只有雙方共同努力，才能切實(shí)提高實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)水平。
西馬特羅檢測(cè)試劑盒
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