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雞ELISA試劑盒的基本操作原理

閱讀:239發(fā)布時間:2015-3-30

   雞ELISA試劑盒對于*和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被,親和素*:先親和素先包被載體,加入*化的DNA,這種包被方法平均、牢固,雞ELISA試劑盒已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。

方法一:用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:

1. 包被:用0.05M PH9,碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml,在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。

2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,37℃孵育0.5~1小時,洗滌。

4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。

5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

    還有一些稀有用到的各種動物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等。詳細(xì)的試驗還要有堅固的理論外也要實(shí)踐,看一下*可不可以應(yīng)用到自己試驗當(dāng)中去。雞ELISA試劑盒但*選用什么,要依據(jù)試驗詳細(xì)來實(shí)踐。雞ELISA試劑盒應(yīng)留意以下原理:因為蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用,這種物理吸附長短特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán),雞ELISA試劑盒故更易吸附到固相載體表面。


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