ELISA檢測(cè)試劑盒解決方案便是酶標(biāo)板上包被二抗，每個(gè)孔加入一定量的酶標(biāo)的小分子，然后加樣品，再加不帶標(biāo)志的檢測(cè)抗體，顯色底物。樣品的目標(biāo)小分子的含量越高，吸光度越低。
3、有些客戶會(huì)用OVA（卵清卵白）做一些哮喘，ELISA檢測(cè)試劑盒過敏性腸炎的模型，然后會(huì)檢測(cè)粘膜特異性的sIgA以及血清內(nèi)里IgG，IgE等指標(biāo)。當(dāng)客戶向我咨詢購(gòu)置這幾個(gè)指標(biāo)的試劑盒的時(shí)候，我很肯定地說這些指標(biāo)的檢測(cè)要你自己特制，不會(huì)有商品化的試劑盒出售的。當(dāng)你baidu一下時(shí)，頁面出來大量的商品化的試劑盒，千篇一律的明書時(shí)候，我真的是蒙了，我懷疑自己跟不上時(shí)代了。我不去評(píng)論這些試劑盒的真假，我仍舊建議做這些檢測(cè)指標(biāo)的朋友，
方法一：用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌，下同)。2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。3.加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。4.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。5.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。6.結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“ "、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的2.1倍，即為陽性。
方法二：用于檢測(cè)未知抗體的間接法：用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中，ELISA檢測(cè)試劑盒加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
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