elisa測(cè)定試劑盒常見問題及解決方法經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
elisa 試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。
下面分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法
1. 選擇試劑
選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣
可能原因： ① 血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣; ② 手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); ③ 加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。解決辦法： ① 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 ② 加樣后及時(shí)放入孵箱。 ③ 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。④ 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 ⑤ 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3. 孵育
可能原因： ① 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*; ② 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法：① 貼封片或加蓋; ② 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4. 洗板
可能原因： ①采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 ② 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞，抽吸不*;洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 ③ 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： ① 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干; ② 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5. 顯色
可能原因： ① 顯色劑配制后放置時(shí)間過長(zhǎng)或使用過期顯色劑; ②加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： ① 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; ② 加樣時(shí)保持顯色劑不外流; ③ A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6. 終止
可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7. 讀板
如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸;盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
elisa測(cè)定試劑盒大鼠山梨醇脫氫酶(SDH)ELISA試劑盒    ，英文名：    SDH ELISA Kit
大鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒    ，英文名：    PEDF ELISA Kit
大鼠色氨酸羥化酶(TPH)ELISA試劑盒    ，英文名：    TPH ELISA Kit
大鼠色氨酸5羥化酶2(TPH2)ELISA試劑盒    ，英文名：    TPH2 ELISA Kit
大鼠三碘甲狀腺原氨酸(T3)ELISA試劑盒    ，英文名：    T3 ELISA Kit
大鼠三碘甲腺原氨酸(TT3)ELISA試劑盒    ，英文名：    TT3 ELISA Kit
大鼠軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)ELISA試劑盒    ，英文名：    COMP ELISA Kit
大鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA試劑盒    ，英文名：    LF/LTF ELISA Kit
大鼠乳酸脫氫酶(LDH)ELISA試劑盒    ，英文名：    LDH ELISA Kit
大鼠肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶Ⅰ(CPT1)ELISA試劑盒    ，英文名：    CPT1 ELISA Kit
大鼠肉毒堿脂酰轉(zhuǎn)移酶(CACT)ELISA試劑盒    ，英文名：    CACT ELISA Kit
大鼠絨毛膜促性腺激素β(β-CG)ELISA試劑盒    ，英文名：    β-CG ELISA Kit
大鼠絨毛膜促性腺激素(CG)ELISA試劑盒    ，英文名：    CG ELISA Kit
大鼠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)ELISA試劑盒    ，英文名：    PAPP-A ELISA Kit
大鼠熱休克因子1(HSF1)ELISA試劑盒    ，英文名：    HSF1 ELISA Kit
大鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA試劑盒    ，英文名：    HSP gp96 ELISA Kit
大鼠熱休克蛋白90-alpha(Hsp90aa1/Hsp86/Hspca)ELISA試劑盒    ，英文名：    Hsp90aa1/Hsp86/Hspca ELISA Kit
大鼠熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒    ，英文名：    HSP-90 ELISA Kit
大鼠熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒    ，英文名：    HSP-70 ELISA Kit
大鼠熱休克蛋白70(HSP70)ELISA試劑盒    ，英文名：    HSP70 ELISA Kit
大鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA試劑盒    ，英文名：    Hsp-60 ELISA Kit
大鼠熱休克蛋白47(HSP47)ELISA試劑盒    ，英文名：    HSP47 ELISA Kit
大鼠熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒    ，英文名：    HSP-40 ELISA Kit
大鼠熱休克蛋白27(HSP-27)ELISA試劑盒    ，英文名：    HSP-27 ELISA Kit
大鼠熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA試劑盒    ，英文名：    HSP-20 ELISA Kit
大鼠缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒    ，英文名：    HIF-1α ELISA Kit
大鼠缺血修飾白蛋白(IMA)ELISA試劑盒    ，英文名：    IMA ELISA Kit
大鼠醛固酮(ALD)ELISA試劑盒    ，英文名：    ALD ELISA Kitelisa測(cè)定試劑盒