elisa酶聯免疫試劑盒檢測步驟：
1. 制備含MMP 底物蛋白的SDS-PAGE 凝膠：推薦分離膠濃度為8%。按照標準程序制備SDSPAGE
凝膠。將10 × substrate G 融化，并90 oC 加熱5 分鐘。分別在濃縮膠和分離膠中額外加
入10 × substrate G 并使之稀釋10 倍，混勻后加入過硫酸銨和TEMED，等待凝膠聚合。
2. 待測樣品1:1 稀釋于2 × SDS-PAGE non-reducing buffer (用完后可自行配制：4% SDS, 100 mM
Tris-Cl pH6.8, 20% glycerol, 0.02% bromophnol blue)，混合后直接上樣。切勿加熱變性，并且僅
使用不加還原劑的上樣緩沖液。可通過預試驗確定加樣量，使用普通蛋白預染Marker 即可。陽
性對照(可選步驟)：可取人、小鼠、大鼠或兔100μl全血與100μl 2 × SDS-PAGE nonreducing
buffer 等體積混合，取5-15μl 上樣。
3. 低電流恒流電泳，每一塊小膠電流為20 mA/gel。溴酚藍跑出凝膠前沿時結束電泳。
4. 洗滌凝膠：取出凝膠，去除濃縮膠，放入容器內。可先用適量蒸餾水沖洗凝膠，然后加入10 ml
1× Buffer A(用蒸餾水稀釋)，室溫漂洗凝膠2 × 30 分鐘。中間換液。
5. 孵育：倒掉Buffer A。加入10 ml 1× Buffer B(蒸餾水稀釋)，室溫或37oC 孵育1~5 小時。陽性
對照或者血中的MMP 通常37oC 孵育1 小時即可顯示。如MMP 活性低，應延長孵育時間為
10 小時或過夜。
6. 顯色：倒掉Buffer B，加入SDS-PAGE 凝膠蛋白質考馬斯亮藍染色液（操作步驟見SDS-PAGE
凝膠蛋白質考馬斯亮藍染色液說明書）。凝膠的大部分區域被深染，在有MMP 條帶的位置
不被染色而形成透亮區域。透明區域的位置和范圍指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及
活性。陽性對照將在66~72 (MMP-2)、92 (MMP-9)、130 (proMMP-9)、225 (proMMP-9) kDa
位置出現透明條帶。
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