鞘氨醇(SPH)ELISA試劑盒說明書
本試劑僅供研究使用  標本：體液

鞘氨醇(SPH)ELISA試劑盒試驗原理：
BFGF試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知BFGF濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將BFGF和生物素標記的抗體同時溫育。人堿性成纖維細胞生長因子ELISA 檢測試劑盒洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中BFGF的濃度呈比例關系。

鞘氨醇(SPH)ELISA試劑盒自備材料
1．蒸餾水。
2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
1．試劑應按標簽儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2．實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3．不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6．洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7．底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8．加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9．按照中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。

2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
2．根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4．甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6．甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8．取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
9．在450nm波長處測定各孔的OD值。

局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到的結果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。

鞘氨醇(SPH)ELISA試劑盒結果判斷與分析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的BFGF標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的BFGF含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍：0-800pg/ml

4、敏感度： 1.0 pg/ml

 Cr  人骨膠原交聯  規格： 48T/96T

 BALP  人骨堿性磷酸酶  規格： 48T/96T

 OT/BGP  人骨鈣素/骨谷氨酸蛋白  規格： 48T/96T

 BMPR-Ⅱ  人骨成型蛋白受體Ⅱ  規格： 48T/96T

 BMPR-1A  人骨成型蛋白受體1A  規格： 48T/96T

 BMP-7  人骨成型蛋白7  規格： 48T/96T

 BMP-4  人骨成型蛋白4  規格： 48T/96T

 BMP-2  人骨成型蛋白2  規格： 48T/96T

 OPGL  人骨保護素配體  規格： 48T/96T

 OPG  人骨保護素  規格： 48T/96T

 GSTpi  人谷胱甘肽硫轉移酶pi基因  規格： 48T/96T

 GSH-Px  人谷胱甘肽過氧化酶  規格： 48T/96T

 GSH  人谷胱甘肽  規格： 48T/96T

 GAD-Ab  人谷氨酸脫羧酶自身抗體  規格： 48T/96T

 GAD  人谷氨酸脫羧酶  規格： 48T/96T

 GDH  人谷氨酸脫氫酶  規格： 48T/96T

 OFQ/N  人孤腓肽  規格： 48T/96T

 Lebtospira  人鉤端螺旋體IgM  規格： 48T/96T

 Lebtospira  人鉤端螺旋體IgG  規格： 48T/96T

 HGV-IgM  人庚型肝炎病毒IgM  規格： 48T/96T

 HGV-IgG  人庚型肝炎病毒IgG  規格： 48T/96T

 T  人睪酮  規格： 48T/96T

 HVA  人高香草酸  規格： 48T/96T

 MHB  人高鐵血紅蛋白  規格： 48T/96T

 u-T4  人高敏甲狀腺素  規格： 48T/96T

 HDL-C  人高密度脂蛋白膽固醇  規格： 48T/96T