ELISA試劑盒實驗室了解本室工作質量

    ELISA試劑盒實驗操作的zui后步驟就是根據得出的實驗數據，做出擬合曲線，計算濃度。這個步驟可以借用專業制作曲線軟件進行分析，如curve expert 1.3，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度，再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，ELISA試劑盒將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

方法一　用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:

    1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。

    2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。

    3.　加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。

    4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。

   5.　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

    6.　結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測O·D值：在ELISA試劑盒檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔O·D值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

1、 派觀察員到實驗室進行試劑調查

這種調查事先不通知，臨時派觀察員到實驗室，采用常規方法，檢驗規定的一組標本，進行評價。

   這種調查方式，容易發現該實驗室存在的實際問題，可以直接給予指導和幫助，解決問題，提高檢驗質量。這種調查通常可以使用真實樣本，避免采用質控物的一些缺點。
2、 發質控物進行調查

    這是國內外室間質評的常用形式。部臨檢中心對乙肝標志物ELISA試劑盒檢驗的室間質評采用定期發放質控物至各ELISA試劑盒實驗室，各實驗室在規定的日期進行檢驗，并將檢驗結果報至部臨檢中心。部臨檢中心經統計分析，將評價結果寄回各實驗室。通過評價，發現差距，并設法改進，以不斷提高檢驗質量。