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博湖試劑-人阿拉伯甘露聚糖ELISA試劑盒取得系列進展

時間:2014/6/9閱讀:839
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   人阿拉伯甘露聚糖ELISA試劑盒LAM試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知LAM濃度的標準品、未知濃度的樣品 加入微孔酶標板內進行檢測。先將LAM和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中LAM的濃度呈比例關系。

操作步驟:

 1.   使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。

2.   根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

3.   加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。

4.   甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

5.   每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

6.   甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

7.   每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。

8.   取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。

9.   在450nm波長處測定各孔的OD值。

 結 果 判 斷 與 分 析:

 1、  儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、  以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的LAM標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的LAM含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度,再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

3、  檢測值范圍: 0-480ng/ml

4、  敏感度:0.1ng/ml

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