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博湖試劑-IL-4抗CD23單抗檢測法

時間:2014/5/20閱讀:858
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IL-4抗CD23單抗檢測法
 
    IL-4能促進B細胞膜表面CD23分子表達,一些BurkittB淋巴細胞瘤株(如Jijoy細胞)未受刺激時,CD23表達水平很低,經IL-4刺激后,CD23的表達呈劑量依賴性增加。用抗CD23單抗間接免疫熒光法染色,可檢測人IL-4活性。
 
    (1)將5X105/mL的Jiioy細胞培養于含10%FCS的RPMI-1640培養液中。
 
    (2)取對數生長期細胞,用新鮮培養液將細胞配成5X 105/mL,接種于24孔板中,lmL/孔。分別加待測標本及標準IL-4(不同稀釋度),并設陰性對照,培養48~72h。
 
    (3)洗細胞2次,以106—107/mL濃度的細胞重懸于含1%BSA,2mmoL/L疊氮鈉的PBS中。將細胞轉人Falcon分析管中,離心棄PBS,加100~L抗CD23單抗(5—10btS/mL),置冰浴中15~30rain,用上述PBS洗2次。
 
    (4)加適當稀釋的FITC標記的羊抗鼠IgC,置冰浴15~30rain,同上洗細胞,重懸細胞于含2mmol/mL疊氮鈉的PBS中。
 
    (5)用流式細胞儀分析CD23分子的表達,以陽性細胞百分率表示,并計算IL-4活性單位;或用熒光顯微鏡觀察CD23分子的表達。
HCC 94 [HCC941122](子宮鱗癌細胞(高分化))     ATCC    株 
A-431(表皮癌細胞)     ATCC    株 
HeLa 229(宮頸癌細胞)     ATCC    株 
CBRH-7919(肝癌細胞)     ATCC    株 
RH-35(肝癌細胞)     ATCC    株 
SHZ-88(乳腺癌細胞)     ATCC    株 
MLTC-1(睪丸間質細胞瘤細胞)     ATCC    株 
L6565(小鼠L6565白血病克隆細胞系)     ATCC    株 
F9(畸胎瘤細胞)     ATCC    株 
LLC Lewis(肺癌細胞)     ATCC    株 
C127(乳腺腫瘤細胞)     ATCC    株 
MFC(胃癌細胞)     ATCC    株 
B16(黑色素瘤細胞)     ATCC    株 

 

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