當前位置:上海邦景實業有限公司>>技術文章>>ELISA測定之顯色操作
在目前的以HRP作為標記酶的商品ELISA試劑盒中,如以TMB為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應用液;如以OPD為底物,則試劑盒提供OPD片劑或粉劑,臨用前配制。一般商品試劑盒顯色反應條件為37℃或室溫反應15~30分鐘。從理論上說,37℃30分鐘才可以使HRP的底物催化反應wan 全,盡管在最初的10分鐘內,絕大部份催化反應即可完成。因此,為使弱陽性樣本孔能有充分的顯色,建議在37℃下反應25~30分鐘后,終止反應比色測定。
此外,在加入底物開始顯色反應前,最好是先檢查一下底物溶液的有效性,即可將A和B兩種液各加一滴于清潔的空板孔或eppendorf管中,觀察是否有顯色出現,如有,則說明底物已變質。以OPD為底物,配好后應為無色,否則就不能使用。以TMB為底物,整個顯色反應過程無需避光,而以OPD為底物,則需避光進行。關于TMB和OPD的顯色反應特點及注意點可參考前面有關章節內容。顯色反應完成后,加入酸終止反應,振蕩混勻后即可進行下面的比色測定或肉眼判斷結果。
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