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細胞提取液反復凍融方法

時間:2022/3/15閱讀:4930
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1、 吸出培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,用yi蛋白酶消化細胞,然后加入適量的培養(yǎng)基將培養(yǎng)板上的細胞沖洗干凈。懸浮細胞可以省略該步驟。

2、 將細胞懸浮液收集到離心管中,在2-8℃下以1000×g離心5分鐘,然后吸去培養(yǎng)基,用預冷PBS洗滌細胞3次。

3、 加入適量的預冷PBS(建議在使用前立即加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。在6孔培養(yǎng)板(約1×106個細胞)中,每個孔加入150-250μL的PBS來重懸細胞。

4、 使樣本在-20℃或-80℃條件和室溫條件下反復凍融,重復凍融過程數(shù)次,直至細胞*裂解。也可以使用超聲波細胞破碎器超聲處理懸浮液來裂解細胞。

5、 2-8℃下以1500×g離心10分鐘,去除細胞碎片,收集上清液,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。


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