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ELISA樣本收集要點與處理方法

時間:2021/10/26閱讀:592
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  做ELISA實驗,在處理樣本前應該先了解收集樣本的注意事項。
 
  樣本收集注意事項:
 
  1.收集血液的試管應為一次性的無熱原,無內毒素試管。
 
  2.血清和血漿避免使用溶血,高血脂標本。
 
  3.標本應清澈透明,懸浮物應離心去除。
 
  4.標本收集后若不及時檢測,需按一次使用量分裝,凍存于-20℃,-80℃電冰箱內,避免反復凍融。
 
  5.可根據標本的實際情況,做適當倍數稀釋(建議做預實驗,以確定稀釋倍數) 。
 
  6.收集標本,盡量做到雙份的用量,避免一次實驗失敗,重復實驗時標本缺失,從而耽誤實驗進程。
 
  7.收集標本時,應該做好防護措施(比如戴手套,口罩,護目鏡等),認為所有標本都具有一定的潛在危險性。
 
  8.樣本處理應該在生物安全柜里面,并且正確使用生物安全柜。
 
  樣本正確的處理方法:
 
  1.血清:將采集的全血靜置冰箱4℃過夜,然后1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
 
  2.血漿:用EDTA,枸櫞酸鈉,肝素等作為抗凝劑,加入血液混勻后,1000-3000rpm離
 
  心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)
 
  保存。
 
  3.組織勻漿:切取組織塊,0.01MPBS中過洗一次;按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例,在冰水中勻漿。勻漿完成后,5000-10000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
 
  4.細胞培養上清:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
 
  5.尿液,腹水,腦脊液等:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃3-6個月)保存。
 
  注:樣品稀釋的一般原則
 
  用戶須查閱相關文獻了解標本內待測因子的含量,決定適當的稀釋倍數,以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的最佳檢測范圍。樣品的稀釋應有詳細記錄。
 

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