ELISA試劑盒實驗原理與標本處理

時間：2020/12/9閱讀：751

ELISA試劑盒試驗原理：

被石蠟包埋的組織切片在二甲苯中脫去石蠟并逐級水化后，進行內(nèi)源性的過氧化物酶淬滅。內(nèi)源性過氧化物酶可以被甲醇或Zymed's Peroxo-Block （目錄號:00-2015）中的3％的過氧化氫所抑制。
說明：非免疫血清用來去除非特異性背景。孵育一抗后，加入二抗，再經(jīng)過一步?jīng)_洗，加入鏈霉親和素過氧化物酶藕聯(lián)物。

ELISA試劑盒操作步驟：

1.使用前將ELISA試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻，置37℃反應30分鐘。

5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。

6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

ELISA試劑盒樣本處理：

1．剛取得的新鮮組織樣本用PBS洗凈。

2．準確稱取50mg組織，加入1ml勻漿緩沖液A，用玻璃勻漿器充分勻漿。

3．在1000g，4℃離心10分鐘，棄沉淀，取上清。

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