elisa酶聯免疫試劑盒反應步驟:

（1）嚴格按照試劑說明書進行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30～60min。

（2）加樣后及時放人孵箱。標本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。

（3）封板溫育時，各孔一定要封嚴，防止陽性標本的液體蒸發，產生周邊現象從而導致“花板"的出現。 

（4）用洗板機洗板時，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干：還要防止針口有纖維蛋白或異物，ELISA試劑盒這些異物在洗板的過程中易產生拖帶現象而導致“花板"的出現。

（5）合理安排檢測量，以免反應板過多造成洗板等待時間長。

（6）加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。

（7）顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。

（8）加樣時保持顯色劑不外流；A、B液應避免接觸金屬器械。加終止液時應避免產生氣泡。

（9）應保證酶標板清潔，整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板"降至zui低限度。elisa酶聯免疫試劑盒從而提高檢測的特異性。并得到更準確、可靠的實驗結果。

elisa酶聯免疫試劑盒使用方法：

1. 標準品的稀釋：本elisa酶聯免疫試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。  

2. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。|

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。