人Elisa試劑盒原理：

人Elisa試劑盒是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術。酶聯免疫吸附試驗的標準程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（capture Ab）固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體（primarydetection Ab），形成一個抗原抗體的復合物。如果該抗體已經用酶（enzyme）標記了，即可用來直接測定抗原的量，若無，則可利用另一個酶標記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質（substrate），作用后產生出現的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關系，依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度。

人Elisa試劑盒加樣：

人Elisa試劑盒的靈敏度較高，則應該按規定將血清稀釋至適當的倍數，以降低非特異性反應，使特異性的抗原抗體反應充分體現出來。 加樣品時，單孔用量要求：≥20ul/指標，如需要做2個復孔則血量≥60ul/指標。如果用量充足，提供50ul/孔/指標。具體用量也需根據試劑盒的要求而定。 吸取樣品時，加樣槍頭不應粘附多余的液體；加樣時不可90度向孔中滴加液體，否則會導致液體殘留在吸頭上，加樣不準確。正確加樣方法應為45度，吸頭貼著孔壁和液面的交界處加入。加樣時速度不可過快，否則無法保證微量加樣的準確性和均一性；要避免樣品加在孔壁上部而產生非特異性吸附。不可將樣品濺出以避免對鄰近孔產生污染。 

人Elisa試劑盒操作步驟：

1、將特異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。

2、加受檢標本，保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。

3、加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。

4、加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。通過比色，測知標本中抗原的量。在臨床檢驗中，此法適用于檢驗各種蛋白質等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗人Elisa試劑盒，包被和酶標用的抗體分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用于包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應，作一步檢測。