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上海邦景實業有限公司

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閱讀：455發布時間：2014-3-4

材料：離心機及離心管、三角燒瓶（25ml）、冰槽、無菌吸管及毛細滴管、透析袋、玻璃棒、棉線及燒杯（500ml）等；

試劑：抗體球蛋白溶液、異硫氰酸熒光素、3%重碳酸鈉水溶液、pH8.0的0.01mol/L 、1%硫柳汞；

Chadwick氏法FITC標記抗體方法與步驟：

1. 抗體的準備。用0—4℃ pH8.0的將免疫球蛋白溶液濃度稀釋為30—40mg/ml，置于三角燒瓶內，放入冰槽中；

2. 熒光素的準備。按每毫克免疫球蛋白加0.01mg熒光素計算，稱取所需的熒光素量，用3%重碳酸鈉水溶液溶解；

3. 將上述已準備好的抗體與熒光色素溶液等量混合，充分攪拌，使其在0—4℃冰箱中結合18—24h；

4. 透析。熒光素與球蛋白結合完畢后，將球蛋白的溶液以2500r/min離心20min，除去其中少量的沉淀物后，裝入透析袋中再置于燒杯中，在0—4℃下用pH8.0的緩沖鹽溶液透析隔夜；

5. 過柱。取透析隔夜的標記物，過葡萄糖凝膠G-25或G-50柱，分離出游離熒光素，收集標記的熒光抗體進行鑒定；

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